آزمایش فرآورده های شیر تخمیر شده ، کشت های اولیه ، کنسانتره های باکتریایی و آماده سازی های باکتریایی باکتری های اسید لاکتیک.

صفحه 1

صفحه 2

ص 3

صفحه 4

ص 5

صفحه 6

صفحه 7

صفحه 8

صفحه 9

ص 10

صفحه 11

ص 12

ص 13

ص 14

استاندارد بین المللی

محصولات غذایی

روشهای تعیین میکروارگانیسمهای لاکتیک

نسخه رسمی

استاندارد استاندارد

گروه Н09

UDC 663 / .665.3.001.4: 006.354

ایالت بین المللی

استاندارد

محصولات غذایی روشهای تعیین میکروارگانیسم های اسید لاکتیک

محصولات غذایی. روشهای تعیین باکتریهای اسید لاکتیک

GOST

10444.11-89

MKS 07.100.30 OKSTU 9109

تاریخ معرفی 01.01.91

این استاندارد در مورد شیرهای تخم مرغی و تخمیر شده ، کشت های اولیه ، کنسانتره های باکتریایی و آماده سازی های باکتریایی باکتری های اسید لاکتیک کاربرد دارد و روشی را برای تعیین میکروارگانیسم های زنده اسید لاکتیک و محتمل ترین خالص آنها (NSP) ایجاد می کند. و همچنین روشهای تعیین باکتریهای جنس Lactobacillus ، Leuconostoc در محصولات طاقچه (به استثنای محصولات شیر کیست ، کشتهای اولیه ، کنسانتره های باکتریایی و آماده سازی باکتریهای باکتریهای اسید لاکتیک). استرپتوکوکهای گروه N نقش استرپتوکوکوس پدیوکوکوس S. thermophilus و تعیین محتمل ترین باکتریهای خالص (MHP) Rola Lactobacillus.

این روش بر اساس کاشت مقدار مشخصی از محصول و (یا) رقیق شدن آن در محیط های غذایی مایع یا آگار انتخابی ، کشت محصولات در شرایط مطلوب و غیره است. در صورت لزوم ، تعیین خصوصیات ریخت شناسی و بیوشیمیایی میکروارگانیسم های شناسایی شده و شمارش آنها.

این روش برای موارد زیر در نظر گرفته شده است:

ایجاد انطباق شاخص های میکروبیولوژیکی کیفیت غذا و محصولات کیستیک ، مواد اولیه ، کنسانتره های باکتریایی و آماده سازی های باکتریایی باکتری های اسید لاکتیک با الزامات مستندات قانونی و فنی ؛

ایجاد ناباروری صنعتی کنسروها:

کشف علل نقص محصولات غذایی.

1. نمونه برداری و آماده سازی نمونه ها

1.1 نمونه برداری و تهیه نمونه های غذایی ، به استثنای شیر تخمیر شده - مطابق با GOST 26668. 26669.

نمونه برداری از محصولات شیر تخمیر شده (خشک و مایع) ، کشت های اولیه ، کنسانتره های باکتریایی و آماده سازی های باکتریایی باکتری های اسید لاکتیک و آماده سازی آنها برای تجزیه و تحلیل - مطابق با GOST 9225 1 2.

1.2 مواد غذایی کنسرو شده از نظر تنگی بررسی می شوند - مطابق با GOST 8756.18.

کنسروهای کامل ، از نظر ظاهری طبیعی ، قبل از آزمایش ، در دمای 30-37 اینچ در ظرفی با ظرفیت حداکثر 1 dm3 به طور کامل به مدت حداقل 5 روز حرارت داده می شوند. در تجاوز به ظرفیت بیش از 1 dm 3 - حداقل 7 فنجان خشک.

محصولات غذایی که تعداد میکروارگانیسم های اسید لاکتیک در آنها استاندارد است ، تحت کنترل درجه حرارت نیستند.

رقیق سازی محصولات در محلول پپتون-نمک مطابق با GOST 26669 تهیه می شود.

رقیق سازی اولیه محصولات با کسر جرمی NaCl بیش از 5 using با استفاده از آب پپتون تهیه می شود. رقیق سازی اولیه ماهی و محصولات گوشتیتهیه شده با استفاده از نمک

GOST R 53430 - 2009.

2. ظاهر ، مواد و واکنش ها

برای آزمایش ، از تجهیزات ، مواد ، معرفها اما GOST 10444.1 استفاده کنید. GOST 9225 و در زیر ذکر شده است:

مقیاسهای آزمایشگاهی برای اهداف عمومی با ویژگیهای اندازه شناسی مطابق با GOST 24104 3. با بیشترین محدودیت وزن تا 200 گرم و حد تحمل 2 میلی گرم for (برای وزن گیری معرف ها):

مقیاسهای آزمایشگاهی برای اهداف عمومی با ویژگیهای اندازه شناسی مطابق با GOST 24104 3. با بیشترین حد وزن تا 200 گرم و حد تحمل 15 میلی گرم for (برای وزن یک محصول) ؛

میکروسکوپ نوری بیولوژیکی با دستگاهی برای میکروسکوپ کنتراست فازی یا سایر مارک های مشابه: روکش شیشه ها مطابق با GOST 6672 ؛ اسلاید مطابق با GOST 9284:

ترموستات با محدوده دمای عملیاتی 28-55 درجه سانتیگراد که امکان حفظ دمای تنظیم شده با خطای '1'C را می دهد. شاخه های چوب پنبه اما GOST 5541 ؛

ذره بین جیبی تاشو با بزرگنمایی 4-10 برابر مطابق با GOST 25706 ؛ پانکراتین برای داروهای باکتریایی و ویروسی: کلروفرم فنی مطابق با GOST 20015 ؛

شیر بدون چربی با اسیدیته بیشتر از 19 "T. بدست آمده از شیر گاو که کمتر از درجه 2 مطابق با GOST 13264 4 تهیه نشده یا پودر شیر بدون چربی مطابق با GOST 10970 5 ؛ هیدروکلراید ال آرژنین ؛ بنزیدین اساسی یا اسید کلریدریک ؛ سیترات پتاسیم: لجن کربوکسیلیک tse ؛ b نیم اکتبر ؛ tween-80 ؛ استات سدیم ؛ سیترات آمونیوم ؛

سولفات منیزیم (MgS0 4 7H 2 0) ؛

سولفات منگنز (MnS0 4 2H 2 0) ؛

سولفات منگنز (MnS0 4 4H 2 0) ؛

اسید سوربیک:

نیگروزین ؛

3. آماده سازی برای آزمایش

3.1 تهیه محلولهای معرف و شاخصهای آزمایش محصولات غذایی (به استثنای فرآورده های شیر تخمیر شده ، کشتهای اولیه ، کنسانتره های باکتریایی و آماده سازیهای باکتریایی باکتریهای اسید لاکتیک)

3.1.1 نشانگر بنفش برمکرزول ، محلول با غلظت جرمی 1 گرم در متر مربع 3: 0.1 گرم بنفش برومکرزول مطابق با قوانین آسپسی منتقل می شود ، با آب مقطر استریل شستشو داده می شود ، به یک لیوان حجمی با ظرفیت 100 سانتی متر 3 ، آورده می شود. حجم به علامت با همان آب. محلول بیش از 3 ماه در دمای اتاق نگهداری نمی شود.

3.1.2 کربنات کلسیم ، سوسپانسیون آبی با غلظت جرمی 30 گرم در متر مکعب 3: 3 گرم کربنات کلسیم ، مطابق با GOST 10444.1. انتقال ، شستشو با آب مقطر ، به ظرف حجمی با ظرفیت 100 سانتی متر 3 ، حجم را به علامت برسانید. سوسپانسیون در دمای (12111) 3 درجه سانتی گراد به مدت 20 دقیقه استریل می شود. سوسپانسیون بیش از 3 ماه در دمای اتاق نگهداری نمی شود.

3.1.3 کاربولفوکسین. محلول غلیظ: 1 گرم فوکسین با 10 سانتی متر 3 96٪ مخلوط می شود الکل اتیلیکو 100 سانتی متر 3 محلول فنل با غلظت جرمی 50 گرم در متر مربع 3.

برای تهیه محلول کاربولفوکسین ، 90 سانتی متر 3 آب مقطر به 10 سانتی متر محلول غلیظ کاربولفوکسین اضافه می شود.

3.1.4 محلول بنفش کریستالی با غلظت جرمی 10 گرم در دسی متر 3: من یک گرم بنفش کریستالی منتقل می کنم ، با آب مقطر شستشو داده می شود ، به یک شیشه حجمی با ظرفیت 100 میلی لیتر "، حجم به علامت می رسد. راه حل این است بیش از 3 ماه در دمای اتاق ذخیره می شود.

3.1.5 سوسپانسیون نیکروزین با غلظت جرمی 100 گرم در مترمکعب ": 10 گرم نیگروسین را با آب مقطر شستشو به ظرف حجمی با ظرفیت 100 سانتی متر 3. فیلتر منتقل می کند.

3.1.6 محلول نمک پپتون مطابق GOST 26669 تهیه می شود.

3.1.7 آب پپتون مطابق با GOST 26669 تهیه شده است.

3.1.8 اسید سوربیک ، محلول ابریشم: 1 گرم اسید سوربیک با شستشو با محلول پیروکسید سدیم با NaOH = 1 mol / dm 3 به ظرف حجمی با ظرفیت 100 سانتی متر 3 منتقل می شود. حجم با همان محلول به علامت می رسد. محلول حاصله مطابق با GOST 26670 با فیلتراسیون غشایی استریل می شود.

مجاز است محلول اسید سوربیک را بدون فیلتراسیون مطابق با قوانین آسپسی تهیه کنید. در حالی که محلول پیروکسید سدیم در آب مقطر استریل آماده می شود.

3.1.9 معرف برای تعیین سیتوکروم ها: 1 گرم بنزیدین پایه یا اسید کلریدریک در 20 سانتی متر 3 از 99.8٪ یخ سرد حل می شود استیک اسید، 30 سانتی متر 3 آب مقطر اضافه کرده و به آرامی حرارت دهید ، پس از سرد شدن ، 50 سانتی متر "96٪ اتیل الکل به محلول اضافه کنید. محلول به مدت 1 ماه در یخچال نگهداری می شود.

3.1.10 محلول فیزیولوژیکی مطابق با GOST 10444.1 تهیه شده است.

3.2 آماده سازی محیط کشت برای آزمایش محصولات طاقچه (به استثنای فرآورده های شیر تخمیر شده ، کشت های اولیه ، کنسانتره های باکتریایی و آماده سازی های باکتریایی باکتری های اسید لاکتیک)

3.2.1 محیط Blnckfeldt متراکم مطابق با GOST 10444.1 تهیه شده است.

3.2.2 چهارشنبه »مایع بلیکفلا: 10 گرم لاکتوز در 950 سانتی متر مکعب از یک ورق آب حل شده حل می شود. 10 گرم گلوکز ، 5 گرم پپتون جوشانده و از طریق فیلتر کاغذی فیلتر می شود. به فیلتراسیون عصاره مخمر 20 سانتی متر 3 اضافه کنید. محلول 32 سانتی متر بروم ارغوان بنفش نوجوانان مطابق با 3.1.1. پی را روی 0.1.3 17 17.3 تنظیم کنید. در لوله های آزمایش استریل ریخته و در دمای (1 11 117) * C به مدت 20 دقیقه استریل می شود.

3.2.3 چهارشنبه بریگز ، همانطور که توسط Shari اصلاح شده است:

15 گرم پپتون به 875 سانتی متر مکعب آب مقطر اضافه می شود. گلوکز 20 گرم 25 سانتی متر عصاره مخمر ، 5 گرم استات سدیم. 5 گرم فسفات پتاسیم تک جا به جا شده. 2 گرم آمونیوم اسید سیتریک. آب گوجه فرنگی 100 سانتی متر 3 (با فرض اینکه آب آن حداقل 4.5 درصد مواد جامد محلول داشته باشد ، اگر آب گوجهحاوی مقدار متفاوتی از ماده خشک است ، سپس آنها به محتوای ماده خشک 4.5 درصد تبدیل می شوند). 1 cm 3 مخفی - 80.5 cm 3 محلول نمک (MgS0 4 7H ؛ 0 -11.5 گرم MnS0 4 4H 2 0 - 2.86 گرم ، FeS0 4 7H 2 0 - 0.68 گرم آب مقطر تا 100 سانتی متر 3) ، 15 گرم آگار.

مخلوط را روی حرارت ملایم می جوشانیم تا آگار کاملاً حل شود. pH را طوری تنظیم کنید که پس از عقیم سازی در دمای 25 درجه سانتی گراد (6.510.1) قرار گیرد. محیط در دمای (1 115 115) * C در طول درمان به مدت 15 دقیقه استریل می شود.

3.2.4 محیط مخمر: در 100 سانتی متر 3 عصاره مخمر مطابق با GOST 10444.1 تهیه شده است. 900 سانتی متر 3 آب مقطر اضافه کنید. 10 گرم استریل شده اما GOST 10444.1 کربنات کلسیم و 100 گرم ساکارز. مخلوط گرم می شود تا ساکارز حل شود ، pH به این ترتیب تنظیم می شود. به طوری که پس از عقیم سازی در دمای 25 "C (0.1 ± 7.1) قرار می گیرد. در لوله های آزمایش اما 10 سانتی متر 3 ریخته می شود و در دمای استریل می شود.< 121 ± 1) ‘С в течение 15 мин.

3.2.5 محیط کلم آگار مطابق با GOST 10444.1 تهیه شده است.

3.2.6 محیط MRS مایع است: 10 گرم پپتون در یک فلاسک حجمی با ظرفیت 1.0 dm3 قرار داده می شود. عصاره مخمر 20 سانتی متر 3. 20.0 گرم گلوکز ، 1.0 سانتی متر 3 بین - 80 ، 2.0 گرم فسفات پتاسیم جایگزین شده. 5.0 گرم استات سدیم ، 2.0 گرم سیترات تری آمونیوم ، 0.2 گرم سولفات منیزیم ، 0.05 گرم سولفات منگنز (MnS0 4 4H 2 0). آب گوشت را به علامت اضافه کنید ؛ اجزاء را با حرارت دادن در حمام آب حل کرده و pH را طوری تنظیم کنید که پس از عقیم سازی در دمای 25 اینچ (6.210.1) قرار گیرد. محیط در لوله های استریل 10 سانتی متری 3 ریخته شده و در اتوکلاو با دمای () 12111) "C به مدت 15 دقیقه. لوله های آزمایش با محیط کشت در دمای (411) درجه سانتیگراد بیش از 30 درجه خشک نگهداری نمی شوند.

3.2.7 محیط MRS agarizov مطابق دستورالعمل مشخص شده در بند 3.2.6 تهیه می شود. با افزودن 15-18 لون. پس از حل شدن اجزاء ، محیط را داخل فلاسک های استریل می ریزند و در اتوکلاو در دمای (12111) "C به مدت 15 دقیقه استریل می کنند. محیط آماده شده در دمای (411) * C به مدت بیش از 30 cg ذخیره نمی شود. به

در صورت لزوم ، برای افزایش انتخاب پذیری ، پس از عقیم سازی ، 1 سانتی متر 3 محلول قلیایی اسید سوربیک را به 1 متر مربع محیط آگارزه یا مایع اضافه می کنیم. 3.1.8

3.2.8 آب گوشت متوسط پپتون pH 9.6:

و آبگوشت پنتون گوشتی مطابق با GOST 10444.1 تهیه شده است. pH را با استفاده از محلولهای قلیایی و اسیدی مطابق با GOST 10444.1 تنظیم کنید تا پس از عقیم سازی 9.6 در 25 درجه سانتیگراد باشد. محیط در دمای (121 ± I) * C به مدت 20 دقیقه استریل می شود.

3.2.9 آب گوشت پپتون متوسط با محتوای کلرید سدیم 6.5 according مطابق GOST تهیه می شود

10444.1 ، اما در حین آماده سازی ، مقدار کلرید سدیم اضافه شده به 65 گرم در 1 dm 3 از محیط افزایش می یابد.

3.2.10 محیط مغذی ساکارز آگار:

100.0 گرم ساکارز ، 15.0 گرم آگار به 1 متر مربع از آب گوشت نپتون اضافه می شود و گاهی اوقات هم می زنند. مخلوط به جوش می آید و همه اجزا به طور کامل حل می شوند.

محیط در دمای 55-45 درجه سانتیگراد خنک می شود و pH به گونه ای تنظیم می شود که پس از عقیم سازی در دمای 25 * C (0.1 ± 7.1) قرار گیرد.

محیط را داخل فلاسک ها ریخته و به مدت 15 دقیقه در دمای (1 12 121) * C استریل می کنند. پس از عقیم سازی و بررسی pH ، محیط به خوبی مخلوط شده و در ظروف پتری ریخته می شود و در دمای (1 4 4) * C بیش از 14 دسی گرم نگهداری نمی شود.

3.2.11. محیط ردی: اساس محیط - 15.0 گرم آگار به فلاسک حاوی 500 سانتی متر 3 گاو تقطیر شده اضافه می شود و در حمام آب گرم می شود تا آگار حل شود. در یک فلاسک دیگر حاوی 500 سانتی متر 3 آب مقطر ، 10.0 گرم سیترات پتاسیم و 15.0 گرم کربوکسیل متیل سلولز را اضافه کرده و با حرارت دادن حل کنید. محتویات هر دو فلاسک مخلوط شده و 3.0 گرم پپتون ، 25 سانتی متر 3 عصاره مخمر اضافه می شود. 1.25 گرم پتاسیم (1 سی سی)<1юрнокнслого двузамешенною. 5.0 г L-аргинин гидрохлорида. нагревают на водяной бане до полного растворения компонентов, охлаждают до температуры 45-55 "С и устанавливают pH таким образом, чтобы после стерилизации он составлял при 25 "С (6.310.2). Основу среды стерилизуют при температуре < 121 ± 1) "С в течение 15 мин и хранят при температуре (4±1) *С не более 30 суг.

برای تهیه محیط تغذیه ای ، 5.0 سانتی متر 3 شیر بدون چربی استریل به 1 متر مربع ذوب شده و در دمای 45-55 اینچ خنک می شود. 100 سانتی متر 3 از سوسپانسیون کربنات کلسیم با غلظت جرمی 30 گرم در متر مربع 3 و 2 سانتی متر 3 محلول کرسول بروم با غلظت جرم بنفش I g / dm3.

3.2.12. محیط مایع روگوسا: 10.0 گرم پپتون در یک فلاسک حجمی با ظرفیت 1.0 dm3 قرار داده می شود.

25.0 سانتی متر عصاره مخمر. 20.0 گرم گلوکز 1.0 سانتی متر 3 راز - 80.6 گرم فسفات پتاسیم تک جابجا شده ، 2.0 گرم سیترات آمونیوم ، 25.0 گرم استات سدیم. 32/1 سانتی متر مکعب استیک اسید یخچالی ، 0.575 گرم سولفات منیزیم. 0.12 گرم سولفات منگنز (MnS0 4 2HPO) ، 0.034 گرم سولفات آهن ، آب مقطر را به علامت اضافه کنید ، اجزا را با حرارت دادن در حمام آب حل کرده و pH را طوری تنظیم کنید که پس از عقیم سازی در دمای 25 درجه سانتی گراد (5.410) قرار گیرد. 1) .10 سانتی متر 3 در لوله های استریل استریل و در اتوکلاو در دمای (12111) * C به مدت 15 دقیقه لوله ها با محیط مغذی در دمای (411) * C بیش از 30 خشک نگهداری می شوند.

3.2.13. محیط روگوسای آگارزه طبق دستورالعمل شرح داده شده در و. 3.2.12. با افزودن

20.0 گرم آگار پس از حل شدن اجزاء ، محیط را داخل فلاسک های استریل می ریزند و در اتوکلاو در دمای (12111) C به مدت 15 دقیقه استریل می کنند. محیط آماده شده بیش از 30 ثانیه در دمای (411) درجه سانتی گراد نگهداری می شود.

3.2.14 محیط آب گوجه فرنگی مطابق با GOST 10444.1 تهیه شده است.

3.2.15 محیط برای تعیین pseudocatalase: در یک فلاسک حجمی با ظرفیت 1 dm3 ، هم بزنید

5.0 پپتون 25 سانتی متر عصاره مخمر. 0.5 سانتی متر 3 بین - 80.0.1 گرم (MnS0 4 4H> 0). 0.5 گرم گلوکز 15 عدد لوپ را با آب گوشت روی آن بریزید ، اجزاء را با حرارت دادن در حمام آب حل کرده و pH را طوری تنظیم کنید که پس از عقیم سازی در دمای 25 * C (6.910.1) قرار گیرد. این ماده در لوله های آزمایش 5-7 سانتی متر 3 ریخته می شود و در اتوکلاو در دمای (12111) * C به مدت 15 دقیقه استریل می شود. پس از عقیم سازی ، لوله ها روی سطحی شیب دار قرار می گیرند تا گیر بیفتد.

3.2.16. چهارشنبه لی:

اساس محیط - 10.0 گرم پپتون در یک فلاسک حجمی با ظرفیت I dm3 قرار می گیرد. عصاره مخمر 50 سانتی متر 3. 5.0 گرم لاکتوز ، 3.0 گرم کربنات کلسیم مطابق با GOST 10444.1 ، 0.5 گرم Na 2 HP () 4. 18 گرم آگار ، آب مقطر را به علامت اضافه کنید ، اجزا را با حرارت دادن در حمام آب حل کرده و pH را طوری تنظیم کنید که پس از عقیم سازی در دمای 25 اینچ (7.011) قرار گیرد. محیط در اتوکلاو در دمای استریل می شود. (12111) * C به مدت 20 دقیقه. و در صورت لزوم بیش از 30 روز در دمای (411) C نگهداری کنید.

برای تهیه محیط تغذیه ای ، 20 سانتی متر 3 از محلول استریل بروم بنفش کرسول با غلظت جرمی 1 گرم در متر مربع 3 به 1 متر مربع از پایه اضافه شده ، مخلوط شده و در ظروف پتری ریخته می شود. محیط در دمای (4 ± 1) * C بیش از 7 خشک نگهداری نمی شود.

3.3 تهیه محیط کشت برای آزمایش محصولات کیستیک ، کشت های اولیه ، کنسانتره های باکتریایی و آماده سازی های باکتریایی باکتری های اسید لاکتیک

3.3.1 تهیه شیر فلج شده

شیر بدون چربی طبیعی یا بازسازی شده به مدت 20 دقیقه جوشانده یا بخارپز می شود و سرد می شود! تا درجه حرارت (2 45 45) "C. اسیدیته فعال به pH (0.1 ± 7.7) می رسد. با افزودن محلول آبی با کسر جرمی NaOH 40٪. به 1000 سانتی متر" شیر ، 0.5 را اضافه کنید تا 1.0 گرم پودر پانکراتین. سپس ، از 5 تا 6 سانتی متر 3 کلروفرم به شیر اضافه می شود. فلاسک را با یک چوب پنبه بسته می کنیم و در دمای (4012) * C به مدت 18-24 ساعت نگه می داریم. در 3-5 ساعت اول ، شیر 2-3 بار هم زده می شود (چوب پنبه پس از هم زدن کمی باز می شود تا کلروفرم حذف شود).

سپس شیر هیدرولیز شده از طریق فیلتر کاغذی فیلتر شده و با آب مقطر به نسبت 1: 1 رقیق می شود. pH اسیدیته فعال (7،110.1) را ایجاد کنید. افزودن محلول آبی با کسر جرمی NaOH 40٪ و برای تهیه آگار با شیر هیدرولیز شده استفاده می شود. در صورت ذخیره سازی ، مقدار کم هیدرولیز شده در اتوکلاو در دمای (1 12 121) * C به مدت 15 دقیقه استریل می شود.

3.3.2 تهیه ملکه آگار هیدرولیز شده

شیر هیدرولیز شده ، cm 3 - 1000:

آگار ، g - 15.

15 لون به 1000 سانتی متر 3 گرم رحم فلج اضافه می شود. محیط را تا زمانی که آگار کاملاً ذوب شده و از طریق پشم پنبه فیلتر می شود ، گرم می شود ، در لوله های آزمایش یا فلاسک ها ریخته و در اتوکلاو در دمای (12111) * C به مدت (1011) دقیقه استریل می شود.

3.3.3. آماده سازی رحم چربی استریل فاقد چربی

چربی کم چربی طبیعی یا بازسازی شده 10 سانتی متر 3 در لوله های آزمایش ریخته می شود و در دمای (12111) C (1011) دقیقه استریل می شود.

4. انجام آزمایش

4.1 آزمایش محصولات غذایی (به استثنای فرآورده های شیر تخمیر شده ، کشت های اولیه ، کنسانتره های باکتریایی و آماده سازی های باکتریایی باکتری های اسید لاکتیک)

4.1.1 برای تعیین میکروارگانیسم ها ، از نمونه محصول یا رقیق سازی اولیه آن استفاده می شود.

برای تعیین وجود و شمارش تعداد میکروارگانیسم ها روی ظروف پتری ، تعدادی رقت از نمونه ای از یک محصول طاقچه ای یا از یک رقت اولیه مطابق با تعداد مجاز میکروارگانیسم های مشخص شده در اسناد قانونی و فنی برای یک مورد خاص تهیه می شود. نوع محصول طاقچه

برای محاسبه NSP ، رقت اولیه و تعدادی ده برابر از نمونه ای از یک محصول طاقچه تهیه می شود تا میکروارگانیسم ها در محصولات با بیشترین رقت شناسایی نشوند. D | من در کاشت حداقل سه رقت متوالی را انتخاب می کنم. سه لوله موازی از هر رقت تلقیح می شود.

4.1.2 D1Y به روش NHF و 1.0 سانتی متر از نمونه آماده شده محصول به محیط مایع تلقیح می شود و (یا) رقیق شدن آن به روش عمق بر روی ظروف پتری گرفته می شود ، برای تلقیح روی ظروف پتری به روش سطحی - به میزان 0.1-0.2 سانتی متر 3

کاشت با روشهای عمیق یا سطحی ، و همچنین با استفاده از فیلتراسیون غشایی ، مطابق با GOST 26670 انجام می شود.

هنگام استفاده از روش فیلتر غشایی ، حجم محصول مایع فیلتر می شود ، که در مستندات قانونی و فنی برای یک محصول طاقچه گسترده مشخص شده است.

4.1.3 برای تعیین حضور یا تعداد LHF میکروارگانیسم های اسید لاکتیک ، تلقیح بر روی یکی از محیط های مایع مشخص شده در pi انجام می شود. 3.2.2 3.2.6 یا 3.2.12

اگر بعد از افزودن محصول به محیط Blinkfelat ، محیط تغییر رنگ داد ، چند قطره محلول ابریشم استریل (NaOH یا KOH) با غلظت جرمی 50 گرم در متر مکعب به آن اضافه کنید تا رنگ اصلی بازسازی شود. به

برای تعیین حضور یا شمارش تعداد میکروارگانیسم های اسید لاکتیک ، بجای کاشت در محیط مایع ، اجازه داده می شود که کاشت را به روش عمیق در یکی از محیط های آگار مشخص شده در بندهای 3.2.1 ، 3.2.5 ، 3.2 انجام دهید. 7 ، 3.2.13 یا 3.2.14

برای تعیین حضور یا تعداد باکتری های NHF از جنس لاکتوباسیلوس ، تلقیح بر روی یکی از محیط های مایع مشخص شده در mon انجام می شود. 3.2.6 یا 3.2.12

برای تعیین حضور یا شمارش تعداد باکتریهای جنس لاکتوباسیلوس ، به جای تلقیح در محیط مایع ، تلقیح با روش غوطه ور در یکی از آگاریزووانیا سایر محیطهای مشخص شده در شماره ها انجام می شود. 3.2.7 یا 3.2.13.

برای تعیین وجود باکتری های جنس Leuconostoc ، تلقیح روی محیط مایع مشخص شده در و انجام می شود. 3.2.4

برای تعیین حضور به جای استفاده از محیط مایع و همچنین شمارش تعداد باکتری های جنس Leuconostoc روی ظروف پتری یا استفاده از روش فیلتراسیون غشایی ، تلقیح سطحی روی محیط آگار مشخص شده در و انجام می شود. 3.2.10

برای تعیین حضور یا شمارش تعداد استرپتوکوکهای جنس N از جنس استرپتوکوکوس ، تلقیح با روش غوطه ور در محیط آگار مشخص شده در بند 3.2.11 انجام می شود. و برای S. thermophilus مطابق با و. 3.2.16.

برای تعیین وجود یا شمارش تعداد باکتری های جنس Pediococcus ، تلقیح با روش غوطه ور در محیط آگار مشخص شده در بند 3.2.3 انجام می شود.

4.1.4 محصولات برای تعیین وجود یا تعداد میکروارگانیسم های اسید لاکتیک. باکتریهای جنس لاکتوباسیلوس استرپتوکوکهای گروه N از جنس استرپتوکوکوس بیش از 5 روز در دمای (1 30 30) * C یا حداکثر 3 روز در دمای (1 37 37) * C انکوبه می شوند. ؛ تلقیحات برای تعیین حضور یا شمارش تعداد باکتری های جنس Leuconostoc حداکثر 5 روز در دمای (1 22 22) * C انکوبه می شوند. تلقیحات برای تعیین حضور یا شمارش تعداد S. thermophilus (3 48 48) ساعت در دمای (1 45 45) * C انکوبه می شوند. تلقیح روی ظروف پتری برای تعیین وجود یا شمارش تعداد باکتری های جنس Leuconostoc به صورت وارونه انکوبه می شود.

هنگامی که علائم قابل مشاهده وجود دارد ، جوجه کشی محصولات روی محیط مایع متوقف می شود

شمارش اولیه مستعمرات بر روی محیط آگار پس از 48 ساعت انجام می شود.

4.1.5 در تلقیح روی محیط آگار برای تعیین حضور یا شمارش تعداد میکروارگانیسم های اسید لاکتیک ، باکتری های جنس لاکتوباسیلوس ، Pediococcus streptococci ، جنس N از جنس استرپتوکوک. S. thermophilus. دسترسی مطابق با GOST 30425 یا به یکی از روش های زیر متوقف می شود:

روی ماده مغذی جامد شده در ظروف پتری ، دومین ماده مذاب و سرد شده را به (45 ± I) * با یک محیط آگارزه به مقدار 5.0 سانتی متر 1 بریزید و بگذارید تا جامد شود:

ظروف پتری در فضایی با 95٪ N 2 و 5٪ C0 2 قرار می گیرند:

ظروف پتری در یک دستگاه هواساز قرار می گیرند. دستگاه بسته است ، با استفاده از پمپ خلاء خلاء 86.6-93.3 kPa ایجاد می شود.

پارافین مایع استریل به هر لوله با یک مایع مایع به مقدار لازم برای به دست آوردن ستونی به ارتفاع حدود 2 سانتی متر اضافه می شود.

4.1.6 تلقیحات روی محیط مایع روزانه نقشه برداری می شود و لوله های آزمایش با علائم رشد قابل مشاهده گرفته می شود. ماهیت رشد روی محیط های مایع در پیوست 2 آمده است. از لوله های آزمایش با علائم رشد ، انتقال به محیط آگاریزون (نگاه کنید به صفحه 4.1.3) با حلقه باکتریولوژیکی به شرح زیر انجام می شود. برای رشد مستعمرات جدا شده محصولات جوجه کشی اما همچنین. 4.1.4

4.1.7 تلقیح روی محیط آگار پس از انکوباسیون مورد بررسی قرار می گیرد و ظروف پتری برای شمارش انتخاب می شوند ، که از 15 تا 150 کلونی مشخصه روییده است.

هنگام تعیین تعداد میکروارگانیسم ها با روش فیلترهای غشایی ، مجاز است که ظروف پتری را برای شمارش انتخاب کنید اگر کمتر از 15 کلنی مشخصه روی فیلترها رشد کرده باشد.

مشخصات مستعمرات معمولی در پیوست 2 آورده شده است.

4.1.8 برای تأیید تعلق مستعمرات مشخصه به میکروارگانیسم های اسید لاکتیک یا باکتری های یکی از جنس های لاکتوباسیلوس ، Leuconostoc. Pediococcus Streptococcus گروه N از جنس Streptococcus. S.thermophilus ، انتخاب شده از محصولات روی و. 4.1.7 یا 4.1.6 حداقل 5 کلنی مشخصه. تعلق هر مستعمره انتخابی به میکروارگانیسم های خاص در رابطه با لکه گرم ثابت می شود. تحرک ، وجود کاتالاز ، علاوه بر این ، هنگام شناسایی باکتری های جنس Leuconostos ، وجود کپسول ها مشخص می شود.

287

گونه های S. S. thermophilus و استرپتوکوکهای گروه N از جنس Streptococcus - وجود رشد در آبگوشت گوشت اپتون با pH 9.6 و در آبگوشت مزوپاتامیا با 6.5٪ NaCl.

4.1.8.1. برای تعیین نسبت میکروارگانیسم ها به لکه گرم ، از کلنی ها اسمیر تهیه می شود ، مطابق با GOST 30425 رنگ آمیزی شده و میکروسکوپ می شود.

4.1.8.2. برای مطالعه تحرک میکروارگانیسم های مستعمرات ، آماده سازی ها به روش قطره آویزان یا خرد شده و میکروسکوپی تهیه می شوند. نتایج میکروسکوپی مطابق ضمیمه I ارزیابی می شوند.

4.1.8.3. فعالیت کاتالاز فرهنگها مطابق با GOST 30425 تعیین می شود.

نتایج تعیین فعالیت کاتالاز مطابق ضمیمه 1 ارزیابی می شود.

پراکسید هیدروژن در باکتری ها بسیار نادر است ؛! Pediococcus احتمالاً به دلیل آنزیم pseudocatalase است. بنابراین ، هنگام تعیین میکروارگانیسم های اسید لاکتیک یا باکتری های جنس Pediococcus ، اگر میکروارگانیسم های گرم مثبت ، بی حرکت در کلنی های مشخص یافت می شوند. پارس یک واکنش کاتالاز مثبت ، عدم وجود سیتوکروم را با تنظیم تست بنزیدین کنترل کنید. Dy که روی ظروف پتری رشد می کند ، کلنی های باکتری های 24-48 ساعته-IX) با محلول بنزیدین ریخته می شود. در بند 3.1.9 مشخص شده است. پس از اشباع محلول کلنی ها ، تقریباً همان حجم 5 درصد پراکسید هیدروژن را به ظرف اضافه کنید. میکروارگانیسم های اسید لاکتیک ، از جمله باکتری های جنس Pediococcus ، حاوی سیتوکروم نیستند. در صورت وجود سیتوکروم ها ، کلنی ها سبز مایل به آبی یا آبی روشن هستند.

در غیاب بنزیدین ، مجاز است که حضور گالاز nsepdoc را روی محیط مورد 3.2.15 با غلظت گلوکز پایین 0.05 determine تعیین کنید.

محصولات مطابق بند 4.1.4 انکوبه می شوند. بر اساس GOST 30425 ، تعیین isseudocatalase به همان روش کاتالاز انجام می شود.

فرهنگ هایی که pseudocatalase را تشکیل می دهند متعلق به جنس Pediococcus هستند.

4.1.8.4. هنگام شناسایی باکتری های جنس Leuconostoc ، آماده سازی و بدون بوری رنگ آمیزی می شود تا کپسول های باکتریایی شناسایی شوند. برای انجام این کار ، یک قطره از یک کشت باکتریایی با یک پودر ریز جوهر سیاه یا یک سوسپانسیون نیگروسین بر روی یک اسلاید میکروسکوپ با چربی و چربی خوب مخلوط می شود.

با کمک یک لیوان دیگر با لبه های صیقلی ، یک اسمیر نازک به سرعت آماده می شود ، که با چندین بار عبور از شعله مشعل ثابت می شود. اسمیر با محلول بنفش کریستالی یا محلول کاربولفوکسین رنگ آمیزی می شود. در ظرفی را با آب بشویید ، بگذارید در هوا خشک شود و به صورت میکروسکوپی انجام شود. مجاز نیست که اسمیر را بین ورقه های کاغذ صافی خشک کنید. زمینه آماده سازی با یک سوسپانسیون نازک از جوهر سیاه یا تیروزین رنگ آمیزی شده است. بدنه باکتریها تک رنگ هستند. کپسولها بدون لکه باقی می مانند

4.1.8.5. هنگام شناسایی استرپتوکوکهای گروه N ، جنس ؛! استرپتوکوکوس ، استرپتوکوکهای گونه S. thennophilus عدم رشد را در آبگوشت مزوپاتامیا با pH 9.6 و در آب گوشت-پپتون با محتوای کلرید سدیم 6.5 determine تعیین می کند.

برای این فرهنگ با توجه به n. 4.1.8 خرده فرهنگ در رسانه های مشخص شده در دوشنبه. 3.2.8 و 3.2.9

تلقیح ها در دمای (1 30 30) 'C به مدت 3 روز انکوبه می شوند. و هنگامی که S. thennophilus شناسایی شد ، تلقیح ها در دمای (1 45 45) 'C به مدت 3 روز انکوبه می شوند.

4.2 آزمایش فرآورده های شیر تخمیر شده ، کشت های اولیه ، کنسانتره های باکتریایی و آماده سازی های باکتریایی باکتری های اسید لاکتیک

4.2.1 تهیه رقتهای محصولات اسیدی (خشک و مایع) مطابق با GOST 9225.

برای تهیه رقتهای کشتهای اولیه ، کنسانتره های باکتریایی و آماده سازیهای باکتریایی با شیر! باکتری ها ، لبه های فتاکون و کیسه را با الکل پاک می کنند ، لبه بطری می سوزد و درپوش برداشته می شود ، لبه کیسه با قیچی پروفیل بریده می شود ، من یک گرم از مواد آزمایش را در یک توزین وزن می کنم. ملات استریل یا پروفیل ، پوشانده شده با درب ظرف پتری یا کاغذ استریل ، کاملاً مالیده شده ، مقدار کمی محلول کلرید سدیم یا فسفات از یک فلاسک حاوی 99 میلی لیتر محلول اضافه کنید ؛ یا بافر. مواد سوسپانسیون در یک فلاسک با کلرید سدیم یا محلول بافر فسفات باقی مانده و رقت دوم I: 100 بدست می آید.

و دومین رقیق سازی فرآورده های شیر تخمیر شده ، کشت های اولیه ، کنسانتره های باکتریایی و آماده سازی های باکتریایی باکتری های اسید رحم ، رقت های زیر را مطابق با تعداد باکتری های اسید رحمی مشخص شده در اسناد هنجاری و فنی ، patsyusya tabl تهیه می کند. من.

4.2.2 کاشت برای شمارش تعداد استرپتوکوک های اسید لاکتیک در محیط تغذیه توصیه شده یا مایع مطابق با NI انجام می شود. 3.3.2 و 3.3.3 و کاشت برای شمارش میزان تزریق اسید لاکتیک - در محیط مایع تهیه شده مطابق بند 3.3.3.

برای تلقیح در محیط مغذی آگار ، رقیق کننده های mc را انتخاب کنید ، هنگامی که در صفحات 15 تا 150 کلونی تلقیح می شود.

هر نمونه مطابق با GOST 9225 1 سانتی متر 3 رقیق کننده مربوطه محصول (جدول 1 را ببینید) روی ظروف پتری تلقیح می شود.

هنگام تلقیح در محیط تغذیه مایع از سه تا چهار رقت گذشته (جدول I را ببینید) I cm "از هر رقت را به دو لوله موازی با شیر بدون چربی استریل اضافه کنید.

4.2.3 لوله های آزمایش یا ظروف پتری را همراه با تلقیحات در ترموستات قرار داده و در دمای (1 30 30) * C برای شمارش باکتری های مزوفیلیک اسید لاکتیک ، در دمای (1 40 40) * C برای شمارش باکتری های اسید لاکتیک ترموفیلیک قرار دهید. و در (1 32 32) * C برای شمارش مشترک باکتریهای اسید لاکتیک مزوفیل و ترموفیلیک. محصولات به مدت 72 ساعت در انکوبه قرار می گیرند.

5. پردازش نتایج

5.1 پردازش نتایج تجزیه و تحلیل محصولات غذایی (به استثنای فرآورده های شیر تخمیر شده ، کشت های اولیه ، کنسانتره های باکتریایی ، آماده سازی های باکتریایی باکتری های اسید لاکتیک)

5.1.1 نتایج تجزیه و تحلیل محصول غذایی برای هر نمونه به طور جداگانه ارزیابی می شود.

5.1.2 اگر هنگام مطالعه خواص فرهنگی ، ریخت شناسی و بیوشیمیایی ، هنگام تعیین:

میکروارگانیسم های اسید لاکتیک حاوی گرم هستند. میله های بی حرکت ، کاتالاز منفی یا غیر اسپور زا. گرامافون بی حرکت ، منفی کاتالاز یا تشکیل یک کوکوس کاگال آزو کوکی ، به این نتیجه برسید که. که میکروارگانیسم های شناسایی شده اسید لاکتیک هستند.

باکتری های جنس لاکتوباسیلوس بدون اسپور ، گرم مثبت و بی حرکت یافت می شوند. چسب های منفی کاتالاز ، سپس در مورد آن نتیجه گیری کنید. که میکروارگانیسم های یافت شده متعلق به جنس لاکتوباسیلوس هستند.

مشخص شد که باکتری های جنس Lcuconostoc بدون اسپور ، گرم ساز هستند. بی حرکت ، کاتالاز منفی ، احاطه شده توسط یک کپسول کوکو ، سپس نتیجه گیری کنید. که میکروارگانیسم های شناسایی شده متعلق به جنس Leuconostoc هستند:

مشخص شد که باکتری های جنس استرپتوکوک از گروه N غیر اسپور زا هستند. گرامافون بی حرکت ، کاتالاز منفی ، در محیط های مغذی با pH 9.6 و 6.5٪ NaCl رشد نمی کند. cocci ، سپس در مورد آن نتیجه گیری کنید. که میکروارگانیسم های شناسایی شده متعلق به جنس استرپتوکوکوس گروه N هستند.

باکتری های جنس Pediocoecus غیر اسپور ساز و گرم مثبت بودند. بی حرکت ، کاتالاز منفی (یا کاتالاز مثبت ، اما آزمایش بنزیدین منفی) یا کوکوس شبه کاتالاز مثبت ، به این نتیجه می رسند. که میکروارگانیسم های شناسایی شده متعلق به جنس Pediocoecus هستند.

مشخص شد که باکتریهای گونه S. thermophilus غیر اسپور زا هستند. famp مثبت بی حرکت مبدل کاتالیزوری کوک های لرموفیلیک که در محیط های مغذی با pH 9.6 و 6.5٪ NaCl رشد نمی کنند. آنها در مورد آن نتیجه گیری می کنند که میکروارگانیسم های شناسایی شده متعلق به گونه Streptococcus themiophilus هستند.

5.1.3 اگر هنگام تأیید مستعمرات مشخصه در 80 cases موارد ، یعنی حداقل در 4 از 5 مستعمره ، رشد گروه ها یا نسلهای خاصی از میکروارگانیسم ها تأیید شود ، در نظر گرفته می شود که همه مستعمرات مشخصه روی یک صفحه متعلق به این هستند گروه ، جنس یا گونه. در موارد دیگر ، تعداد میکروارگانیسم ها بر اساس درصد کلنی های تأیید شده به تعداد کل مستعمرات مشخصه ای که برای تأیید گرفته شده اند ، تعیین می شود.

5.1.4 هنگام تعیین NSP یا هنگام تلقیح محصول بر روی محیط مایع ، لوله های آزمایش مثبت تلقی می شوند ، اگر در خرده فرهنگ بعدی در محیط آگار و تأیید مستعمرات مشخصه ، میکروارگانیسم های گروه ها ، جنس ها یا گونه های تعیین شده حداقل در یک کلنی مشخص مشخص شود.

5.1.5 محتمل ترین تعداد (NHF) میکروارگانیسم ها براساس تعداد لوله های مثبت مطابق با GOST 30425 تعیین می شود.

اگر رقت های ده برابر انتخاب شده برای کاشت بیشتر بود ، به عنوان مثال 10 -5. 10 "4 و 10" \ سپس مقدار جدول NHF در تفاوت بین رقتهای ده برابر انتخاب شده و جدولی ، یعنی 100 ضرب می شود.

اگر رقتهای ده برابر انتخاب شده برای تلقیح کمتر بود ، به عنوان مثال 10 درجه (1 گرم). 10 "". 10 ~ 2 ، سپس مقدار جدول NHF با تفاوت بین رقت های ده برابر انتخاب شده و جدولی تقسیم می شود ، یعنی به 10.

5.1.6 نتایج تعیین تعداد میکروارگانیسم ها با تلقیح در ظروف پتری یا با روش N HP یا استفاده از روش فیلتراسیون غشایی در هر 1 گرم یا 1 سانتی متر "محصول محاسبه شده و مطابق با الزامات GOST 26670 ثبت می شود.

5.1.7 نتایج تعیین حضور میکروارگانیسم ها در نمونه خاصی از محصول به شرح زیر بیان می شود: میکروارگانیسم های اسید لاکتیک (در صورت لزوم ، جنس یا گونه را نشان می دهند) در نمونه محصول یافت می شوند یا یافت نمی شوند.

5.2 پردازش نتایج تجزیه و تحلیل فرآورده های شیر تخمیر شده ، کشت های اولیه ، کنسانتره های باکتریایی و آماده سازی های باکتریایی باکتری های اسید لاکتیک.

5.2.1 با توسعه باکتری های اسید لاکتیک در یک محیط مایع - شیر - کشک شیر.

برای محاسبه تعداد کل باکتری های اسید لاکتیک (استرپتوکوک ها و باسیل ها) ، به سه رقیق کننده آخر که شیر در آن خمیر شده است توجه کنید.

یک ویژگی عددی ایجاد کنید. این شامل سه رقم است که تعداد لوله های شیر را در سه رقت اخیر نشان می دهد. اولین رقم مشخصه عددی مربوط به رقیق شدن شیر است که در دو لوله آزمایش جمع شده است. اعداد زیر نشان دهنده تعداد لوله های شیر خمیری در دو رقیق بعدی است.

با توجه به ویژگی های عددی مطابق جدول. 2 محتمل ترین تعداد میکروارگانیسم های اسید لاکتیک را پیدا کنید. که در رقیق سازی که اولین رقم مشخصه عددی از آن شروع می شود ضرب می شود.

جدول 2

ویژگی عددی	بیشتر میکروارگانیسم های isroi1Cos در عفونت دو لوله آزمایش موازی	ویژگی عددی	محتمل ترین تعداد میکروارگانیسم ها در "عفونت دو لوله موازی

ترکیبات نامناسب در جدول گنجانده نشده است.

تعداد بدست آمده مربوط به تعداد سلولهای باکتری اسید لاکتیک در 1 گرم یا 1 سانتیمتر از محصول است.

چاپ رسمی تجدید چاپ ممنوع است

از 1 ژوئیه 2002 ، GOST 24104 - 2001 اجرا شد. GOST R 53228-2008 در قلمرو فدراسیون روسیه در حال اجرا است.

در قلمرو فدراسیون روسیه فعالیت می کند

GOST 10444.11-89

استاندارد بین المللی

محصولات غذایی

روشهای تعیین میکروارگانیسمهای لاکتیک

نسخه رسمی

استاندارد استاندارد

UDC 663 / .665.3.001.4: 006.354

ایالت بین المللی

گروه Н09

استاندارد

محصولات غذایی روشهای تعیین میکروارگانیسم های اسید لاکتیک

محصولات غذایی. روشهای تعیین باکتریهای اسید لاکتیک

MKS 07.100.30 OKSTU 9109

تاریخ معرفی 01.01.91

این استاندارد در مورد مواد غذایی و فرآورده های شیر تخمیر شده ، کشت های اولیه ، کنسانتره های باکتریایی و آماده سازی های باکتریایی باکتری های اسید لاکتیک کاربرد دارد و روشی را برای تعیین میکروارگانیسم های زنده اسید لاکتیک و محتمل ترین آنها (NSP) ، و همچنین روش هایی برای تعیین محصولات غذایی (به استثنای فرآورده های شیر تخمیر شده ، کشت های اولیه ، کنسانتره های باکتریایی و آماده سازی های باکتریایی باکتری های اسید لاکتیک) باکتری های جنس Lactobacillus ، Leuconostoc ، استرپتوکوک های گروه N از جنس Streptococcus ، Pediococcus ، S. thermophilus و تعیین محتمل ترین تعداد (MP) باکتری های جنس لاکتوباسیلوس.

این روش بر اساس کاشت مقدار معینی از محصول و (یا) رقیق شدن آن در محیطهای غذایی مایع یا آگار انتخابی ، کشت محصولات در شرایط مطلوب و در صورت لزوم ، تعیین خواص ریخت شناسی و بیوشیمیایی میکروارگانیسم های شناسایی شده و شمارش آنها است.

این روش برای موارد زیر در نظر گرفته شده است:

ایجاد انطباق شاخص های میکروبیولوژیکی با کیفیت غذا و محصولات شیر پرورشی ، کشت های اولیه ، کنسانتره های باکتریایی و آماده سازی های باکتریایی باکتری های اسید لاکتیک با الزامات مستندات قانونی و فنی ؛

ایجاد ناباروری صنعتی کنسرو ؛

روشن شدن علل نقص در محصولات غذایی.

1. نمونه برداری و آماده سازی نمونه ها

1.1 نمونه برداری و تهیه نمونه های غذایی ، به جز شیر تخمیر شده - مطابق با GOST 26668 ، 26669.

1.2 مطابق GOST 8756.18 مواد غذایی کنسرو شده از نظر تنگی بررسی می شوند.

کنسروهای کامل ، از نظر ظاهری طبیعی ، قبل از آزمایش در دمای 30-37 درجه سانتی گراد در ظرفی با ظرفیت حداکثر 1 dm3 به طور کامل به مدت حداقل 5 روز ، در ظرفی با ظرفیت بیش از 1 dm 3 - حداقل 7 روز

محصولات غذایی که تعداد میکروارگانیسم های اسید لاکتیک در آنها استاندارد است ، تحت کنترل درجه حرارت نیستند.

رقیق سازی محصولات در محلول پپتون-نمک مطابق با GOST 26669 تهیه می شود.

رقیق سازی اولیه محصولات با کسر جرمی NaCl بیش از 5 using با استفاده از آب پپتون تهیه می شود. رقیق سازی اولیه ماهی و فرآورده های گوشتی با استفاده از نمک تهیه می شود.

* در قلمرو فدراسیون روسیه ، GOST R 53430-2009 در حال اجرا است.

چاپ رسمی تجدید چاپ ممنوع است

2. ظاهر ، مواد و واکنش ها

برای آزمایش ، از تجهیزات ، مواد ، معرفها مطابق با GOST 10444.1 ، GOST 9225 و موارد زیر استفاده کنید:

مقیاسهای آزمایشگاهی برای استفاده عمومی با ویژگیهای اندازه شناسی مطابق با GOST 24104 *، با حداکثر وزن حداکثر تا 200 گرم و محدوده تحمل 2 میلی گرم ((برای وزن گیری معرفها) ؛

مقیاسهای آزمایشگاهی برای استفاده عمومی با مشخصات اندازه شناسی مطابق با GOST 24104 *، با حداکثر محدودیت وزن تا 200 گرم و حد تحمل 15 میلی گرم ((برای وزن محصول) ؛

میکروسکوپ نوری بیولوژیکی با دستگاهی برای میکروسکوپ کنتراست فاز یا سایر مارک های مشابه ؛ پوشش ها مطابق با GOST 6672 ؛ عینک های شیئی مطابق با GOST 9284 ؛

یک ترموستات با محدوده دمای کار 28-55 درجه سانتی گراد ، که اجازه می دهد تا دمای تنظیم شده با خطای ± 1 درجه سانتیگراد حفظ شود. شاخه های چوب پنبه مطابق با GOST 5541 ؛

ذره بین جیبی تاشو با بزرگنمایی 4-10 برابر مطابق با GOST 25706 ؛ پانکراتین برای داروهای باکتریایی و ویروسی ؛ کلروفرم فنی مطابق با GOST 20015 ؛

شیر بدون چربی با اسیدیته بیش از 19 درجه T ، بدست آمده از شیر گاو ، مطابق با GOST 13264 ** کمتر از درجه 2 تهیه شده یا شیر خشک بدون چربی مطابق با GOST 10970 *** ؛ L- آرژنین هیدروکلراید ؛ بنزیدین پایه یا اسید کلریدریک ؛ سیترات پتاسیم ؛ کربوکسی متیل سلولز ؛ دوقلو -80؛ استات سدیم ؛ سیترات آمونیوم ؛

سولفات منیزیم (MgS0 4 7H 2 0) ؛

سولفات منگنز (MnS0 4 2H 2 0) ؛

سولفات منگنز (MnS0 4 4H 2 0) ؛

اسید سوربیک ؛

نیگروزین ؛

3. آماده سازی برای آزمایش

3.1.2 کربنات کلسیم ، سوسپانسیون آبی با غلظت جرمی 30 گرم در متر مربع 3: 3 گرم کربنات کلسیم استریل شده مطابق با GOST 10444.1 ، انتقال ، شستشو با آب مقطر ، به شیشه حجمی با ظرفیت 100 سانتی متر 3 ، حجم را به علامت سوسپانسیون در دمای (1 + 121) درجه سانتی گراد به مدت 20 دقیقه استریل می شود. سوسپانسیون بیش از 3 ماه در دمای اتاق نگهداری نمی شود.

3.1.3 کاربولفوکسین ، محلول غلیظ: 1 گرم فوکسین با 10 سانتیمتر 3 از 96٪ اتیل الکل و 100 سانتیمتر 3 از محلول فنول با غلظت جرمی 50 گرم در متر مربع 3 مخلوط می شود.

برای تهیه محلول کاربولفوکسین ، 90 سانتی متر 3 آب مقطر به 10 سانتی متر 3 محلول غلیظ کاربولفوکسین اضافه می شود.

3.1.4 محلول بنفش کریستالی با غلظت جرمی 10 گرم در متر مکعب 3: 1 گرم بنفش کریستالی منتقل می شود و با آب مقطر شستشو داده می شود و به یک شیشه حجمی با ظرفیت 100 سانتی متر 3 می رسد و حجم آن تا حد مجاز افزایش می یابد. محلول بیش از 3 ماه در دمای اتاق نگهداری نمی شود.

* از 1 ژوئیه 2002 ، GOST 24104-2001 معرفی شد. GOST R 53228-2008 در قلمرو فدراسیون روسیه در حال اجرا است.

** در قلمرو فدراسیون روسیه ، GOST R 52054-2003 در حال اجرا است.

*** در قلمرو فدراسیون روسیه ، GOST R 52791-2007 در حال اجرا است.

3.1.5 سوسپانسیون نیکروزین غلظت جرمی 100 گرم / متر مکعب 3: 10 گرم نیگروسین منتقل می شود ، با آب مقطر شستشو داده می شود ، به شیشه حجمی با ظرفیت 100 سانتی متر 3 ، حجم را به علامت می رسانند ، تا دمای 45- گرم می شود. 50 درجه سانتیگراد در حمام آب ، سپس از طریق فیلتر پنبه و گاز فیلتر می شود.

3.1.6 محلول پپتون-نمک مطابق با GOST 26669 تهیه می شود.

3.1.7 آب پپتون مطابق با GOST 26669 تهیه شده است.

3.1.8 اسید سوربیک ، محلول قلیایی: 1 گرم اسید سوربیک با شستشو با محلول هیدروکسید سدیم با NaOH = 1 mol / dm 3 به یک شیشه حجمی با ظرفیت 100 سانتی متر 3 منتقل می شود ، حجم با همان محلول به علامت می رسد به محلول حاصله مطابق با GOST 26670 با فیلتراسیون غشایی استریل می شود.

مجاز است که محلول اسید سوربیک را بدون فیلتراسیون مطابق با قوانین آسپسی تهیه کنید ، در حالی که محلول هیدروکسید سدیم در آب مقطر استریل آماده می شود.

3.1.9 معرف برای تعیین سیتوکروم ها: 1 گرم بنزیدین یا اسید کلریدریک پایه در 20 سانتی متر 3 از 99.8٪ اسید استیک یخبندان حل می شود ، 30 سانتی متر 3 آب مقطر اضافه شده و به آرامی گرم می شود ، پس از سرد شدن ، 50 سانتی متر 3 از 96٪ اتیل الکل به محلول اضافه می شود ... محلول را به مدت 1 ماه در یخچال نگهداری کنید.

3.1.10 محلول فیزیولوژیکی مطابق با GOST 10444.1 تهیه شده است.

3.2 آماده سازی محیط کشت برای آزمایش محصولات غذایی (به استثنای فرآورده های شیر تخمیر شده ، کشت های اولیه ، کنسانتره های باکتریایی و آماده سازی های باکتریایی باکتری های اسید لاکتیک)

3.2.1 محیط Blikfeldt متراکم مطابق با GOST 10444.1 تهیه شده است.

3.2.2 محیط Blikfeldt مایع است: 10 گرم لاکتوز ، 10 گرم گلوکز ، 5 گرم پپتون در 950 سانتی متر 3 آب مقطر حل شده ، جوشانده و از طریق فیلتر کاغذی فیلتر می شود. به فیلتراسیون 20 سانتی متر عصاره مخمر ، محلول 32 سانتی متر برومکرزول بنفش اضافه کنید و. 1 ، pH را روی 7.3 + 0.1 تنظیم کنید ، داخل لوله های استریل بریزید و در دمای (1 11 117) درجه سانتی گراد به مدت 20 دقیقه استریل کنید.

3.2.3 چهارشنبه بریگز ، اصلاح شده توسط شارپ:

در 875 سانتیمتر 3 آب مقطر 15 گرم پپتون ، 20 گرم گلوکز ، 25 سانتیمتر عصاره مخمر ، 5 گرم استات سدیم ، 5 گرم فسفات پتاسیم تک جایگزین ، 2 گرم سیترات آمونیوم ، 100 سانتی متر 3 آب گوجه فرنگی اضافه کنید. (بر اساس این واقعیت که در آب میوه حداقل 4.5 sol جامدات محلول وجود دارد ، اگر آب گوجه فرنگی حاوی مقدار متفاوتی از مواد جامد باشد ، مجدداً برای محتوای جامدات 4.5 rec مجدداً محاسبه کنید) ، 1 سانتی متر 3 بین - 80 ، 5 سانتی متر 3 نمک محلول (MgS0 4 7H 2 0 - 11.5 گرم ، MnS0 4 4H 2 0 - 2.86 گرم ، FeS0 4 7H 2 0 - 0.68 گرم ، آب مقطر تا 100 سانتی متر 3) ، 15 گرم آگار.

مخلوط را روی حرارت ملایم می جوشانیم تا آگار کاملاً حل شود. pH را طوری تنظیم کنید که پس از عقیم سازی در دمای 25 درجه سانتی گراد (0.1 + 6.5) قرار گیرد. محیط در دمای (1 + 115) درجه سانتی گراد به مدت 15 دقیقه استریل می شود.

3.2.4 محیط مخمر: در 100 سانتی متر 3 عصاره مخمر تهیه شده مطابق با GOST 10444.1 ، 900 سانتی متر 3 آب مقطر ، 10 گرم استریل شده مطابق با GOST 10444.1 کربنات کلسیم و 100 گرم ساکارز اضافه کنید. مخلوط گرم می شود تا ساکارز حل شود ، pH به گونه ای تنظیم می شود که پس از عقیم سازی در دمای 25 درجه سانتی گراد (0.1 7. 7.1)) قرار گیرد ، در لوله های آزمایش 10 سانتی متر 3 ریخته شود و در دمای (121 + 1) درجه سانتی گراد استریل شود. 15 دقیقه.

3.2.5 محیط کلم آگار مطابق با GOST 10444.1 تهیه شده است.

3.2.6 محیط MRS مایع است: در یک فلاسک حجمی با ظرفیت 1.0 dm 3 ، 10 گرم پپتون ، 20 cm 3 عصاره مخمر ، 20.0 گرم گلوکز ، 1.0 cm 3 tween - 80 ، 2.0 g فسفات پتاسیم جایگزین ، 5 ، 0 گرم استات سدیم ، 2.0 گرم سیترات تری آمونیوم ، 0.2 گرم سولفات منیزیم ، 0.05 گرم سولفات منگنز (MnS0 4 4H 2 0) ، آب گوشت را به علامت اضافه کنید. اجزاء را با حرارت دادن در حمام آب حل کرده و pH را طوری تنظیم کنید که پس از عقیم سازی در دمای 25 درجه سانتی گراد (0.1 + 6.2 +) قرار گیرد. محیط در 10 سانتی متر 3 در لوله های آزمایش استریل ریخته می شود و در اتوکلاو در دمای (1 + 121) درجه سانتی گراد به مدت 15 دقیقه استریل می شود. لوله ها با محیط کشت حداکثر 30 روز در دمای (1 + 4) درجه سانتی گراد نگهداری می شوند.

3.2.7 MRS متوسط آگار طبق دستور مشخص شده در و. 6 ، با افزودن 15-18 گرم آگار. پس از حل شدن اجزاء ، محیط را درون فلاسک های استریل ریخته و در اتوکلاو در دمای (1 + 121) درجه سانتی گراد به مدت 15 دقیقه استریل می شود. محیط آماده شده در دمای (1 + 4) درجه سانتیگراد حداکثر 30 روز نگهداری می شود.

3.2.8 آب گوشت متوسط پپتون pH 9.6:

در آب گوشت پپتون تهیه شده مطابق با GOST 10444.1 ، pH با استفاده از محلول های قلیایی و اسیدی مطابق با GOST 10444.1 تنظیم می شود به طوری که پس از عقیم سازی 9.6 در 25 درجه سانتی گراد است. محیط در دمای (1 + 121) درجه سانتی گراد به مدت 20 دقیقه استریل می شود.

3.2.9 آب گوشت پپتون متوسط با محتوای کلرید سدیم 6.5 according مطابق GOST تهیه می شود

10444.1 ، اما در حین آماده سازی ، مقدار کلرید سدیم اضافه شده به 65 گرم در 1 dm 3 از محیط افزایش می یابد.

3.2.10 محیط مغذی ساکارز آگار:

100.0 گرم ساکارز ، 15.0 گرم آگار به 1 متر مربع از آب گوشت-پپتون اضافه می شود ، گاهی اوقات هم می زنیم ، مخلوط تا جوش گرم می شود و تمام اجزاء کاملاً حل می شوند.

محیط تا دمای 55-45 درجه سانتیگراد سرد می شود و pH به گونه ای تنظیم می شود که پس از عقیم سازی در دمای 25 درجه سانتی گراد (0.1 / 7.1 + 7.1) قرار گیرد.

محیط را در فلاسک ها ریخته و به مدت 15 دقیقه در دمای (1 + 121) درجه سانتیگراد استریل می شود. پس از عقیم سازی و بررسی pH ، محیط به خوبی مخلوط شده و در ظروف پتری ریخته می شود و در دمای (1 + 4) درجه سانتی گراد به مدت بیش از 14 روز نگهداری نمی شود.

3.2.11. ردی متوسط: اساس محیط - در یک فلاسک حاوی 500 سانتی متر 3 آب مقطر ، 15.0 گرم آگار اضافه کنید و در حمام آب گرم کنید تا آگار حل شود. در یک فلاسک دیگر حاوی 500 سانتی متر 3 آب مقطر ، 10.0 گرم سیترات پتاسیم و 15.0 گرم کربوکسی متیل سلولز را اضافه کرده و با حرارت دادن حل کنید. محتویات هر دو فلاسک مخلوط شده و 3.0 گرم پپتون ، 25 سانتیمتر عصاره مخمر ، 1.25 گرم فسفات پتاسیم جایگزین ، 5.0 گرم هیدروکلراید L-arginine اضافه می شود ، در حمام آب گرم می شود تا اجزای آن کاملاً حل شوند ، سرد می شوند. در دمای 55-45 درجه سانتی گراد و pH را طوری تنظیم کنید که پس از عقیم سازی در دمای 25 درجه سانتی گراد (0.2 ± 6.3) قرار گیرد. پایه محیط در دمای (1 + 121) درجه سانتی گراد به مدت 15 دقیقه استریل می شود و بیش از 30 روز در دمای (1 + 4) درجه سانتی گراد نگهداری نمی شود.

برای تهیه یک ماده مغذی ، 5.0 سانتی متر 3 شیر بدون چربی استریل ، 100 سانتی متر 3 از سوسپانسیون کربنات کلسیم با غلظت جرمی 30 گرم در متر مربع و 2 سانتی متر 3 محلول بنفش برومکرزول با غلظت جرمی 1 گرم / dm 3.

3.2.12. محیط مایع روگوسا: 10.0 گرم پپتون در یک فلاسک حجمی با ظرفیت 1.0 dm3 قرار داده می شود ،

25.0 سانتی متر 3 عصاره مخمر ، 20.0 گرم گلوکز ، 1.0 سانتی متر 3 بین - 80 ، 6.0 گرم فسفات پتاسیم جایگزین ، 2.0 گرم سیترات آمونیوم ، 25.0 گرم استات سدیم ، 1.32 سانتی متر 3 اسید استیک یخچالی ، 0.575 گرم سولفات منیزیم ، 0.12 گرم سولفات منگنز (MnS0 4 2H 2 0) ، 0.034 گرم سولفات آهن ، آب مقطر را به علامت اضافه کنید ، اجزاء را با حرارت دادن در حمام آب حل کرده و pH را طوری تنظیم کنید که پس از عقیم سازی در 25 درجه سانتی گراد (5.4 + 0.1 0.1) قرار گیرد. ) محیط در 10 سانتی متر 3 در لوله های آزمایش استریل ریخته می شود و در اتوکلاو در دمای (1 + 121) درجه سانتی گراد به مدت 15 دقیقه استریل می شود. لوله ها با محیط کشت حداکثر 30 روز در دمای (1 + 4) درجه سانتی گراد نگهداری می شوند.

3.2.13. محیط روگوسای آگارزه طبق دستورالعمل شرح داده شده در و. 3.2.12 ، با افزودن

20.0 گرم آگار پس از حل شدن اجزاء ، محیط را در فلاسک های استریل ریخته و در اتوکلاو در دمای (1 + 121) درجه سانتی گراد به مدت 15 دقیقه استریل می شود. محیط آماده شده در دمای (1 + 4) درجه سانتیگراد بیش از 30 روز نگهداری می شود.

3.2.14 محیط آب گوجه فرنگی مطابق با GOST 10444.1 تهیه شده است.

3.2.15 متوسط برای تعیین pseudocatalase: قرار دادن در یک فلاسک حجمی با ظرفیت 1 dm 3

5.0 پپتون ، 25 سانتی متر 3 عصاره مخمر ، 0.5 سانتی متر 3 بین - 80 ، 0.1 گرم (MnS0 4 4H 2 0) ، 0.5 گرم گلوکز ، 15 گرم آگار آب گوشت -پپتون را به علامت اضافه کنید ، اجزای آن را با حرارت دادن در آب حل کنید. حمام کنید و pH را طوری تنظیم کنید که پس از عقیم سازی در دمای 25 درجه سانتی گراد (0.1 / 6.9 +) قرار گیرد. محیط در لوله های آزمایش 5-7 سانتی متر 3 ریخته می شود و در اتوکلاو در دمای (1 + 121) درجه سانتی گراد به مدت 15 دقیقه استریل می شود. پس از عقیم سازی ، لوله ها روی سطحی شیب دار قرار می گیرند تا گیر بیفتد.

3.2.16. چهارشنبه لی:

بر اساس محیط - 10.0 گرم پپتون ، 50 سانتی متر 3 عصاره مخمر ، 5.0 گرم لاکتوز ، 3.0 گرم کربنات کلسیم استریل شده مطابق GOST 10444.1 ، 0.5 گرم Na 2 HP0 4 در یک فلاسک حجمی با ظرفیت قرار می گیرد از 1 dm 3 ، 18 گرم آگار ، آب مقطر را به علامت اضافه کنید ، اجزا را با حرارت دادن در حمام آب حل کرده و pH را طوری تنظیم کنید که پس از عقیم سازی در دمای 25 درجه سانتی گراد (1 7 7.0) قرار گیرد. محیط در اتوکلاو در دمای (1 + 121) درجه سانتی گراد به مدت 20 دقیقه استریل می شود و در صورت لزوم ، بیش از 30 روز در دمای (1 + 4) درجه سانتی گراد نگهداری می شود.

برای تهیه محیط تغذیه ای ، 20 سانتی متر 3 محلول استریل بنفش برومکرزول با غلظت جرمی 1 گرم در متر مربع 3 به 1 متر مربع از پایه اضافه شده ، مخلوط شده و در ظروف پتری ریخته می شود. این محیط در دمای (1 + 4) درجه سانتیگراد بیش از 7 روز نگهداری نمی شود.

3.3 تهیه محیط کشت برای آزمایش فرآورده های شیر تخمیر شده ، کشت های اولیه ، کنسانتره های باکتریایی و آماده سازی های باکتریایی باکتری های اسید لاکتیک

3.3.1 تهیه شیر هیدرولیز شده

شیر بدون چربی طبیعی یا بازسازی شده به مدت 20 دقیقه جوشانده یا با بخار جاری درمان می شود و تا دمای (2 + 45) درجه سانتی گراد سرد می شود. اسیدیته فعال با افزودن محلول آبی با کسر جرمی NaOH 40٪ به pH (7.7 + 0.1) می رسد. به 1000 سانتی متر مکعب شیر 0.5 تا 1.0 گرم پودر پانکراتین اضافه کنید. سپس 5 تا 6 سانتی متر 3 کلروفرم به شیر اضافه کنید. فلاسک با درپوش چوب پنبه بسته می شود و در دمای (2 + 40) درجه سانتی گراد به مدت 18-24 ساعت نگهداری می شود. در 3-5 ساعت اول ، شیر 2-3 بار هم زده می شود (پس از هم زدن ، چوب پنبه کمی باز می شود تا کلروفرم حذف شود).

سپس شیر هیدرولیز شده از طریق یک فیلتر کاغذی فیلتر شده و با آب مقطر به نسبت 1: 1 رقیق می شود ، اسیدیته فعال با افزودن یک محلول آبی با کسر جرمی NaOH 40٪ و pH (7.1 + 0.1) تنظیم می شود. برای تهیه آگار با شیر هیدرولیز استفاده می شود. در صورت ذخیره ، شیر هیدرولیز شده در اتوکلاو در دمای (1 + 121) درجه سانتی گراد به مدت 15 دقیقه استریل می شود.

3.3.2 آماده سازی شیر هیدرولیز شده آگار

شیر هیدرولیز ، سانتی متر 3 - 1000 ؛

آگار ، g - 15.

به 1000 سانتی متر 3 شیر هیدرولیز شده 15 گرم آگار اضافه کنید. محیط را گرم می کنیم تا آگار کاملاً ذوب شود و از طریق پشم پنبه فیلتر شود ، در لوله های آزمایش یا فلاسک ها ریخته شود و در اتوکلاو در دمای (1 + 121) درجه سانتی گراد به مدت (1 + 10) دقیقه استریل شود.

3.3.3. تهیه شیر بدون چربی استریل

شیر بدون چربی طبیعی یا بازسازی شده در لوله های آزمایش 10 سانتی متر 3 ریخته می شود و در دمای (1 + 121) درجه سانتی گراد (10 + 1) دقیقه استریل می شود.

4. انجام آزمایش

4.1 آزمایش محصولات غذایی (به استثنای فرآورده های شیر تخمیر شده ، کشت های اولیه ، کنسانتره های باکتریایی و آماده سازی های باکتریایی باکتری های اسید لاکتیک)

4.1.1 برای تعیین میکروارگانیسم ها ، از نمونه آماده شده محصول یا رقت اولیه آن استفاده کنید.

برای تعیین حضور و شمارش تعداد میکروارگانیسم ها روی ظروف پتری ، تعدادی رقت از یک نمونه غذا یا از رقت اولیه مطابق با تعداد مجاز میکروارگانیسم های مشخص شده در اسناد قانونی و فنی برای نوع خاصی از غذا تهیه می شود. تولید - محصول.

برای محاسبه NSP ، رقت اولیه و تعدادی ده برابر از نمونه محصول غذایی تهیه می شود تا میکروارگانیسم ها در محصولات با بیشترین رقت شناسایی نشوند. برای کاشت ، حداقل سه رقت متوالی را انتخاب کنید. سه لوله موازی از هر رقت تلقیح می شود.

4.1.2 برای کاشت در محیط مایع با روش NHF و روی ظروف پتری با روش عمق ، 1.0 سانتی متر 3 از نمونه آماده شده محصول و (یا) رقیق شدن آن ، برای کاشت روی ظروف پتری به روش سطحی - با 0.1-0.2. سانتی متر 3

کاشت با روشهای عمیق یا سطحی ، و همچنین با استفاده از فیلتراسیون غشایی ، مطابق با GOST 26670 انجام می شود.

هنگام استفاده از روش فیلتر غشایی ، حجم یک محصول مایع فیلتر می شود ، که در اسناد قانونی و فنی برای نوع خاصی از محصولات غذایی نشان داده شده است.

4.1.3 برای تعیین وجود یا تعداد میکروارگانیسم های LHF اسید لاکتیک ، تلقیح بر روی یکی از محیط های مایع مشخص شده در پاراگراف ها انجام می شود. 3.2.2 ، 3.2.6 یا 3.2.12

اگر پس از افزودن محصول به محیط بلیکفلد ، محیط تغییر رنگ داد ، چند قطره محلول قلیایی استریل (NaOH یا KOH) با غلظت جرمی 50 گرم در متر مکعب به آن اضافه می شود تا رنگ اصلی بازیابی شود.

برای تعیین حضور یا تعداد باکتری های NHF از جنس لاکتوباسیلوس ، تلقیح بر روی یکی از محیط های مایع مشخص شده در پاراگراف ها انجام می شود. 3.2.6 یا 3.2.12

برای تعیین حضور یا شمارش تعداد باکتری های جنس لاکتوباسیلوس ، به جای تلقیح در محیط مایع ، تلقیح به روش عمیق در یکی از محیط های آگار مشخص شده در پاراگراف ها انجام می شود. 3.2.7 یا 3.2.13.

برای تعیین وجود باکتری های جنس Leuconostoc ، تلقیح روی محیط مایع مشخص شده در بند 3.2.4 انجام می شود.

برای تعیین حضور به جای استفاده از محیط مایع و همچنین شمارش تعداد باکتری های جنس Leuconostoc روی ظروف پتری یا استفاده از روش فیلتراسیون غشایی ، تلقیح سطحی روی محیط آگار مشخص شده در بند 3.2.10 انجام می شود.

برای تعیین حضور یا شمارش تعداد استرپتوکوکهای گروه N از جنس استرپتوکوک ، تلقیح با روش عمیق در محیط آگار مشخص شده در بند 3.2.11 و برای S. thermophilus ، محیط مطابق بند 3.2.16 انجام می شود. استفاده می شود.

4.1.4 محصولات برای تعیین حضور یا شمارش تعداد میکروارگانیسم های اسید لاکتیک ، باکتری های جنس لاکتوباسیلوس استرپتوکوکهای گروه N از جنس استرپتوکوکوس بیش از 5 روز در دمای (30 + 1) درجه سانتیگراد یا بیشتر انکوبه نمی شوند. بیش از 3 روز در دمای (37 + 1) درجه سانتیگراد ؛ تلقیح ها برای تعیین حضور یا شمارش تعداد باکتری های جنس Leuconostoc حداکثر 5 روز در دمای (1 + 22) درجه سانتیگراد انکوبه می شوند. محصولات برای تعیین حضور یا شمارش تعداد S. thermophilus (3 + 48) ساعت در دمای (1 + 45) درجه سانتیگراد انکوبه می شوند. تلقیح روی ظروف پتری برای تعیین وجود یا شمارش تعداد باکتری های جنس Leuconostoc به صورت وارونه انکوبه می شود.

هنگامی که علائم قابل مشاهده ظاهر می شود ، جوجه کشی محصولات روی محیط مایع متوقف می شود

شمارش اولیه مستعمرات بر روی محیط آگار پس از 48 ساعت انجام می شود.

روی ماده مغذی جامد شده در ظروف پتری ، لایه دوم ماده ذوب شده و سرد شده را در محیط آگار (1 + 45) درجه سانتی گراد به میزان 5.0 سانتی متر 3 بریزید و بگذارید تا جامد شود.

ظروف پتری در یک محیط گازی متشکل از 95٪ N2 و 5٪ CO2 قرار می گیرند.

ظروف پتری در یک دستگاه هواساز قرار می گیرند. دستگاه بسته است ، با استفاده از پمپ خلاء خلاء 86.6-93.3 kPa ایجاد می شود.

4.1.6 تلقیحات روی محیط مایع روزانه مورد بررسی قرار می گیرد و لوله هایی با علائم رشد قابل مشاهده گرفته می شود. ماهیت رشد روی محیط های مایع در پیوست 2 آمده است. از لوله های آزمایش با علائم رشد ، خرده فرهنگ روی محیط آگار (بند 4.1.3 را ببینید) با حلقه باکتریولوژیکی انجام می شود تا رشد کلنی های جدا شده به دست آید. محصولات مطابق بند 4.1.4 انکوبه می شوند.

مشخصات مستعمرات معمولی در پیوست 2 آورده شده است.

4.1.8 برای تأیید تعلق مستعمرات مشخصه به میکروارگانیسم های اسید لاکتیک یا باکتری های یکی از جنس های Lactobacillus ، Leuconostoc ، Pediococcus ، استرپتوکوک های گروه N از جنس Streptococcus ، S. thermophilus ، حداقل 5 کلنی مشخصه از محصولات مطابق بند انتخاب می شوند. 4.1.7 یا 4.1.6 تعلق هر مستعمره انتخابی به میکروارگانیسم های خاص در رابطه با لکه گرم ، تحرک ، وجود کاتالاز ، علاوه بر این ، هنگام شناسایی باکتری های جنس Leuconostos ، هنگام شناسایی استرپتوکوک ، وجود کپسول ها مشخص می شود.

گونه کو S. ترموفیلوس و استرپتوکوکهای گروه N از جنس استرپتوکوک - وجود رشد در آبگوشت مزوپاتامیا با pH 9.6 و در آبگوشت مزوپاتامیا با 6.5٪ NaCl.

4.1.8.2. برای مطالعه تحرک میکروارگانیسم های مستعمرات ، آماده سازی ها به روش قطره آویزان یا خرد شده و میکروسکوپی تهیه می شوند. نتایج میکروسکوپی مطابق ضمیمه 1 ارزیابی می شود.

4.1.8.3. فعالیت کاتالاز فرهنگها مطابق با GOST 30425 تعیین می شود.

نتایج تعیین فعالیت کاتالاز مطابق ضمیمه 1 ارزیابی می شود.

تجزیه پراکسید هیدروژن در باکتریهای جنس Pediococcus به دلیل آنزیم pseudocatalase امکان پذیر است. بنابراین ، هنگام تعیین میکروارگانیسم های اسید لاکتیک یا باکتری های جنس Pediococcus ، اگر میکروارگانیسم های گرم مثبت و بی حرکت که واکنش کاتالاز مثبت را نشان می دهند در کلنی های مشخص یافت می شود ، با تعیین آزمایش بنزیدین ، عدم وجود سیتوکروم را کنترل کنید. برای انجام این کار ، کلنی های باکتری های 24 تا 48 ساعته روی ظروف پتری با محلول بنزیدین مشخص شده در و. 3.1.9 پس از اشباع محلول کلنی ها ، تقریباً همان حجم 5 درصد پراکسید هیدروژن را به ظرف اضافه کنید. میکروارگانیسم های اسید لاکتیک ، از جمله باکتری های جنس Pediococcus ، حاوی سیتوکروم نیستند. در صورت وجود سیتوکروم ها ، کلنی ها سبز مایل به آبی یا آبی روشن هستند.

در صورت عدم وجود بنزیدین ، مجاز به تعیین وجود pseudocatalase بر روی محیط و. 3.2.15 با غلظت گلوکز پایین - 0.05.

محصولات در انکوبه و. 4.1.4 ، تعیین pseudocatalase همانند کاتالاز مطابق با GOST 30425 انجام می شود.

فرهنگ هایی که pseudocatalase را تشکیل می دهند متعلق به جنس Pediococcus هستند.

با کمک یک لیوان دیگر با لبه های صیقلی ، یک اسمیر نازک به سرعت آماده می شود ، که با چندین بار عبور از شعله مشعل ثابت می شود. اسمیر با محلول بنفش کریستالی یا محلول کاربولفوکسین رنگ آمیزی می شود. در ظرفی را با آب شستشو دهید ، در هوا بگذارید تا خشک شود و به صورت میکروسکوپی انجام شود. مجاز نیست که اسمیر را بین ورقه های کاغذ صافی خشک کنید. زمینه آماده سازی با یک سوسپانسیون نازک از جوهر سیاه یا نیگروزین رنگ آمیزی شده است. بدنه باکتریها تک رنگ هستند ، کپسولها بدون لکه باقی می مانند.

4.1.8.5. هنگام شناسایی استرپتوکوکهای گروه N از جنس Streptococcus ، استرپتوکوکهای گونه S. thermophilus ، عدم رشد بر روی آبگوشت مزوپاتامیا با pH 9.6 و بر روی آب گوشت-پپتون با محتوای کلرید سدیم 6.5 determined تعیین می شود.

برای این فرهنگ در و. 4.1.8 خرده فرهنگ در رسانه های مشخص شده در pi. 3.2.8 و 3.2.9

محصولات در دمای (1 + 30) درجه سانتی گراد به مدت 3 روز و پس از شناسایی انکوبه می شوند

محصولات S. thermophilus در دمای (1 + 45) درجه سانتی گراد به مدت 3 روز انکوبه می شوند.

4.2 آزمایش فرآورده های شیر تخمیر شده ، کشت های اولیه ، کنسانتره های باکتریایی و آماده سازی های باکتریایی باکتری های اسید لاکتیک

4.2.1 تهیه رقتهای فرآورده های شیر تخمیر شده (خشک و مایع) مطابق با GOST 9225.

برای آماده سازی رقیق کننده های اولیه ، کنسانتره های باکتریایی و آماده سازی باکتریایی باکتری های اسید لاکتیک ، لبه های بطری و کیسه با الکل پاک می شود ، لبه بطری می سوزد و درپوش برداشته می شود ، لبه کیسه با قیچی های پروفیل شده ، 1 گرم از ماده آزمایش شده را در یک ملات استریل یا پروفیل پوشانده شده و روی آن را با یک ظرف استریل یا کاغذ درپوش بپوشانید ، کاملاً مالش دهید و مقدار کمی محلول کلرید سدیم یا بافر فسفات را از یک فلاسک حاوی 99 سانتی متر مکعب اضافه کنید. یا بافر مواد معلق با فسفات باقی مانده با کلرید سدیم یا محلول بافر فسفات ریخته می شود و رقت دوم 1: 100 به دست می آید.

و دومین رقیق سازی فرآورده های شیر تخمیر شده ، کشت های اولیه ، کنسانتره های باکتریایی و آماده سازی های باکتریایی باکتری های اسید لاکتیک ، رقت های زیر را مطابق با تعداد باکتری های اسید لاکتیک مشخص شده در اسناد قانونی و فنی ، با استفاده از جدول تهیه می کنند. یکی

میز 1

4.2.2 کاشت برای شمارش تعداد استرپتوکوک های اسید لاکتیک در آگار یا محیط تغذیه مایع مطابق با pi تهیه می شود. 3.3.2 و 3.3.3 و تلقیح برای شمارش تعداد چوب اسید لاکتیک - در یک محیط مایع مطابق با بند 3.3.3 تهیه شده است.

برای تلقیح در محیط مغذی آگار ، این رقت ها انتخاب می شوند ، هنگامی که روی صفحات 15 تا 150 کلونی تلقیح می شوند.

هر نمونه مطابق با GOST 9225 1 سانتی متر 3 رقیق کننده مربوطه محصول (جدول 1 را ببینید) روی ظروف پتری تلقیح می شود.

هنگام تلقیح در محیط تغذیه مایع از سه تا چهار رقت گذشته (جدول 1 را ببینید) 1 سانتی متر 3 از هر رقت را به دو لوله موازی با شیر بدون چربی استریل اضافه کنید.

4.2.3 لوله های آزمایش یا ظروف پتری با تلقیح در یک ترموستات قرار داده شده و برای شمارش باکتری های مزوفیلیک اسید لاکتیک در دمای (1 + 30) درجه سانتی گراد ، در دمای (1 + 40) درجه سانتی گراد برای شمارش باکتری های اسید لاکتیک ترموفیلیک و در (1 + 32) درجه سانتی گراد برای شمارش مشترک باکتری های اسید لاکتیک مزوفیل و ترموفیلیک. محصولات به مدت 72 ساعت در انکوبه قرار می گیرند.

5. پردازش نتایج

5.1 پردازش نتایج تجزیه و تحلیل محصولات غذایی (به استثنای فرآورده های شیر تخمیر شده ، کشت های اولیه ، کنسانتره های باکتریایی ، آماده سازی های باکتریایی باکتری های اسید لاکتیک)

5.1.1 نتایج تجزیه و تحلیل محصول غذایی برای هر نمونه به طور جداگانه ارزیابی می شود.

5.1.2 اگر هنگام مطالعه خواص فرهنگی ، ریخت شناسی و بیوشیمیایی ، هنگام تعیین:

میکروارگانیسم های اسید لاکتیک میله های گرم مثبت ، بی حرکت ، کاتالاز منفی یا غیر اسپور ، گرم مثبت ، بی حرکت ، کاتالاز منفی یا شبه کاتالاز تشکیل می دهند ، سپس نتیجه می گیرند که میکروارگانیسم های شناسایی شده اسید لاکتیک هستند.

باکتری های جنس لاکتوباسیلوس میله های بدون اسپور ، گرم مثبت ، بی حرکت ، کاتالاز منفی پیدا کردند ، سپس نتیجه گرفتند که میکروارگانیسم های شناسایی شده متعلق به جنس لاکتوباسیلوس هستند.

باکتریهای جنس Leuconostoc بدون اسپور ، گرم مثبت ، بی حرکت ، کاتالاز منفی ، در محاصره کپسول کوکی یافت می شوند ، سپس نتیجه می گیرند که میکروارگانیسمهای یافت شده متعلق به جنس Leuconostoc هستند.

باکتریهای جنس استرپتوکوکوس گروه N غیر اسپور ساز ، گرم مثبت ، بی حرکت ، کاتالاز منفی بودند که در محیطهای مغذی با pH 9/6 و 6/5 درصد NaCl ، کوکوس رشد نمی کنند ، سپس آنها نتیجه می گیرند. که میکروارگانیسم های شناسایی شده متعلق به جنس استرپتوکوک گروه N هستند.

آنها باکتری های جنس Pediococcus را پیدا کردند که بدون اسپور ، گرم مثبت ، بی حرکت ، کاتالاز منفی (یا مثبت کاتالاز ، اما آزمایش بنزیدین منفی) یا شبه کاتالاز مثبت هستند ، به این نتیجه رسیدند که میکروارگانیسم های شناسایی شده متعلق به جنس Pediococcus ؛

باکتری های ترموفیلوس ، بدون اسپور ، گرم مثبت ، بی حرکت ، کاتالاز منفی ، کوکوهای گرما دوست ، که در محیط های مغذی با pH 9.6 و 6.5٪ NaCl رشد نمی کنند ، یافت می شوند ، سپس نتیجه می گیرند که میکروارگانیسم های شناسایی شده متعلق به گونه Streptococcus thermophilus.

5.1.3 اگر هنگام تأیید مستعمرات مشخصه در 80 cases موارد ، یعنی حداقل در 4 از 5 مستعمره ، رشد گروه ها یا نسلهای خاصی از میکروارگانیسم ها تأیید شود ، در نظر گرفته می شود که همه مستعمرات مشخصه رشد شده در یک صفحه متعلق به این گروه ، جنس یا گونه. در موارد دیگر ، تعداد میکروارگانیسم ها بر اساس درصد کلنی های تأیید شده به تعداد کل مستعمرات مشخصه ای که برای تأیید گرفته شده اند ، تعیین می شود.

5.1.4 هنگام تعیین NSP یا هنگام تلقیح محصول روی محیط مایع ، لوله های آزمایش مثبت تلقی می شوند ، اگر با انتقال بعدی به محیط آگار و تأیید مستعمرات مشخصه ، میکروارگانیسم های گروه ها ، جنس ها یا گونه های تعیین شده حداقل در یک کلنی مشخص مشخص شود. به

5.1.5 محتمل ترین تعداد (NHF) میکروارگانیسم ها براساس تعداد لوله های آزمایش مثبت مطابق با GOST 30425 تعیین می شود.

اگر رقتهای ده برابر انتخاب شده برای کاشت بیشتر بود ، به عنوان مثال 10 _3 ، 10 -4 و 10 -5 ، مقدار جدول NHF در تفاوت بین رقتهای ده برابر انتخاب شده و جدولی ضرب می شود ، یعنی 100.

اگر رقتهای ده برابر انتخاب شده برای کاشت کمتر بود ، به عنوان مثال 10 درجه (1 گرم) ، 10 -1 ، 10 -2 ، سپس مقدار جدول NSP بر تفاوت بین رقتهای ده برابر انتخاب شده و جدولی تقسیم می شود ، یعنی ، تا 10

5.1.6 نتایج تعیین تعداد میکروارگانیسم ها با تلقیح در ظروف پتری یا با روش NHF یا استفاده از روش فیلتراسیون غشایی در هر 1 گرم یا 1 سانتی متر 3 محصول محاسبه شده و مطابق با الزامات GOST 26670 ثبت می شود.

5.2 پردازش نتایج تجزیه و تحلیل فرآورده های شیر تخمیر شده ، کشت های اولیه ، کنسانتره های باکتریایی و آماده سازی های باکتریایی باکتری های اسید لاکتیک.

5.2.1 با توسعه باکتری های اسید لاکتیک در یک محیط مایع - شیر - کشک شیر.

با توجه به ویژگی های عددی مطابق جدول. 2 محتمل ترین تعداد میکروارگانیسم های اسید لاکتیک را بیابید که در رقیق سازی که اولین رقم مشخصه عددی از آن شروع می شود ضرب می شود.

جدول 2

ترکیبات نامناسب در جدول گنجانده نشده است.

تعداد حاصله مربوط به تعداد سلولهای باکتری اسید لاکتیک در 1 گرم یا 1 سانتی متر 3 محصول است.

نمونه ای از محاسبه احتمالی تعداد میکروارگانیسم ها در صورت عفونت دو لوله موازی در پیوست 3 آورده شده است.

اگر لازم است تعداد استرپتوکوک ها و باسیل ها را متمایز کرد ، یک آماده سازی میکروسکوپی مطابق با GOST 9225 از لوله های آزمایش که شیر در آن سفت می شود ، تهیه می شود ، آنها مورد بررسی قرار می گیرند و لوله های آزمایشی که در آنها باسیل و استرپتوکوک وجود دارد جداگانه مشخص شده است.

شمارش تعداد استرپتوکوک ها یا چوب های اسید لاکتیک همانطور که در بالا نشان داده شده است انجام می شود.

5.2.2 شمارش تعداد مستعمرات رشد یافته باکتری های اسید لاکتیک در محیط آگار و محاسبه مجدد محتوای آنها در 1 گرم یا 1 سانتی متر 3 محصول مطابق با GOST 9225 انجام می شود.

پیوست 1 مرجع

ویژگی های میکروارگانیسم ها

نام میکروارگانیسم ها

مشخصه

میکروارگانیسم های اسید لاکتیک (به استثنای جنس Sporolacto-bacillus که مطابق با GOST 30425 مشخص شده است)

باکتری های جنس لاکتوباسیلوس

باکتری های لجن ساز از جنس Leuconostoc

استرپتوکوکهای گروه N از جنس استرپتوکوکوس

باکتری های جنس Pediococcus

استرپتوکوک S. ترموفیلوس

میله های بدون اسپور ، گرم مثبت ، بی حرکت ، کاتالاز منفی یا بدون اسپور ، گرم مثبت ، بی حرکت ، کاتالاز منفی یا شبه کاتالاز تشکیل دهنده کوکوس

میله های گرم مثبت ، بدون اسپور ، کوتاه یا بلند ، بی حرکت ، کاتالاز منفی

شکل گرم مثبت ، بدون اسپور ، کروی یا بیضی شکل ، به صورت زوج یا زنجیره ای قرار گرفته است ، توسط کپسولی احاطه شده است که بر اساس گرم ، کوکوس های بی حرکت کاتالاز منفی

گرم مثبت ، بدون اسپور ، به شکل زنجیرهای کوتاه و بلند ، بی حرکت ، منفی کاتالاز ، در محیط های مغذی با pH 9.6 و 6.5٪ کوکوس NaCl رشد نمی کند

گرم مثبت ، به صورت زوج یا به شکل زنجیرهای کوتاه یا بلند ، بی حرکت ، منفی کاتالاز ، گرما دوست ، در محیط های کشت با pH 9.6 و 6.5٪ کوکوس NaCl رشد نمی کند

پیوست 2 مرجع

ویژگی های مستعمرات میکروارگانیسم های لاکتیک در مورد AGARIZED و ویژگی رشد در رسانه های مایع

میکروارگانیسم ها	محیط تغذیه ای	ویژگی مستعمرات یا ماهیت رشد در محیط مایع
میکروارگانیسم های اسید لاکتیک	مایع Blikfeldt	تغییر رنگ محیط از بنفش به زرد ، کدر بودن محیط یا تشکیل رسوب ، تکامل گاز امکان پذیر است
	بلیکفلد آگار	مستعمرات کوچک ، صاف یا خشن هستند
	نامیده می شود ، آب گوجه فرنگی متوسط
	کلم آگار	مستعمرات توسط یک منطقه شفاف احاطه شده است
باکتری های اسید لاکتیک از جنس	روگوسا و MRS آگار	مستعمرات بی رنگ با قطر هستند
لاکتوباسیلوس یا میکرو اسید لاکتیک	تماس گرفت	عدسی 1 تا 3 میلی متری یا ستاره ای شکل
موجودات زنده		فرم نوا
	مایع Cattail و MRS	تار شدن محیط
باکتری های اسید لاکتیک از جنس	آگار مغذی با	مستعمرات محدب ، گرد ، مخاطی هستند
	ساکارز	خیره شدن هنگام برداشتن مستعمرات با یک سوزن یا حلقه باکتریولوژیکی ، الیاف مخاط تشخیص داده می شود
باکتری های اسید لاکتیک از جنس		S.lactis مستعمرات سفید و گچی را تشکیل می دهد
استرپتوکوک گروه N		نشانه ، دور ، در اطراف مستعمرات ممکن است مناطق روشنگری وجود داشته باشد مستعمرات S. cremoris کوچک ، زرد ، بیضوی هستند
باکتری های اسید لاکتیک از جنس	چهارشنبه بریگز در حالت-	مستعمرات کوچک ، صاف یا خشن هستند
	داستانهای تیز
استرپتوکوک اسید لاکتیک گونه		مستعمرات زرد ، گرد یا بیضوی هستند
		به شکل ، در اطراف آن مناطق روشنگری مشاهده می شود

پیوست 3 مرجع

مثال محاسبه بیشترین تعداد احتمال اسید لاکتیک باکتری

با روش کاهش محدودیت

رقت های گرفته شده ................. 1: 10 1: 100 1: 1000 1: 10000

تعداد لوله های تلقیح شده .......... 2 2 2 2

تعداد لوله های شیر گرفته 2 2 1 1

در نتیجه ، ویژگی عددی 211. خواهد بود که با جدول مطابقت دارد. 2 تا 13.0 این عدد باید در رقیق سازی که اولین رقم مشخصه عددی از آن شروع شده است ضرب شود (در مثال ، این رقت 1: 100 است).

بنابراین ، 1 سانتی متر 3 حاوی 1300 باکتری اسید لاکتیک (13.0x100 = 1300) است.

رقیق سازی صورت گرفته .................
تعداد لوله های تلقیح شده ..........
تعداد لوله های شیر گرفته.
استرپتوکوک ها به صورت میکروسکوپی یافت می شوند
برخی از آماده سازی رقیق کننده های زیر .........
چوب اسید لاکتیک در میکروفون یافت می شود
آماده سازی های روسکوپی رقیق کننده های زیر.
ویژگی عددی برای: استرپتوکوک ها برابر است. ...

تعداد احتمالی میکروب ها برای استرپتوکوک ها یکسان است.
باباها ...........................

با ضرب در رقت ، تعداد استرپتوکوک ها را در 1 سانتی متر 3 - 7000 ، چوب - 250 دریافت می کنیم.

اطلاعات اطلاعات

1. توسط Gosagroprom اتحاد جماهیر شوروی توسعه یافته و ارسال شده است

2. با فرمان کمیته دولتی اتحاد جماهیر شوروی در زمینه مدیریت کیفیت و استانداردهای محصول مورخ 28.11.89 شماره 3502 تأیید و وارد اثر شد.

3. جایگزینی GOST 10444.11-75

4. اسناد قانونی و مرجع و اسناد فنی

تعیین NTD که پیوند در آن داده شده است	شماره مورد
GOST 5541-2002
GOST 6672-75
GOST 8756.18-70
GOST 9225-84	1.1, 2, 4.2.1, 4.2.2, 5.2.1, 5.2.2
GOST 9284-75
GOST 10444.1-84	2, 3.1.2, 3.1.10, 3.2.1, 3.2.4, 3.2.5, 3.2.8, 3.2.9, 3.2.14, 3.2.16
GOST 10970-87
GOST 13264-88
GOST 20015-88
GOST 24104-88
GOST 25706-83
GOST 26668-85
GOST 26669-85	1.1, 1.2, 3.1.6, 3.1.7
GOST 26670-91	3.1.8, 4.1.2, 5.1.6
GOST 30425-97	4.1.5 ، 4.1.8.1 ، 4.1.8.3 ، 5.1.5 ، ضمیمه 1

5. محدودیت مدت اعتبار مطابق پروتکل شماره 5-94 شورای بین المللی استانداردسازی ، اندازه گیری و صدور گواهینامه (NUS 11-12-94) حذف شد

6. انتشار مجدد آوریل 2010

4.1.5 ، 4.1.8.1 ، 4.1.8.3 ، 5.1.5 ، ضمیمه 1

5. محدودیت دوره اعتبار مطابق پروتکل N 5-94 شورای بین المللی استانداردسازی ، اندازه گیری و صدور گواهینامه (IUS 11-12-94) برداشته شده است.

6. انتشار مجدد آوریل 2010

این استاندارد در مورد مواد غذایی و فرآورده های شیر تخمیر شده ، کشت های اولیه ، کنسانتره های باکتریایی و آماده سازی های باکتریایی باکتری های اسید لاکتیک کاربرد دارد و روشی را برای تعیین میکروارگانیسم های زنده اسید لاکتیک و محتمل ترین آنها (NSP) ، و همچنین روش هایی برای تعیین محصولات غذایی (به استثنای فرآورده های شیر تخمیر شده ، کشت های اولیه ، کنسانتره های باکتریایی و آماده سازی های باکتریایی باکتری های اسید لاکتیک) باکتری های جنس Lactobacillus ، Leuconostoc ، استرپتوکوک های گروه N از جنس Streptococcus ، Pediococcus ، S. thermophilus و تعیین محتمل ترین تعداد (MP) باکتری های جنس لاکتوباسیلوس.

این روش بر اساس کاشت مقدار معینی از محصول و (یا) رقیق شدن آن در محیطهای غذایی مایع یا آگار انتخابی ، کشت محصولات در شرایط مطلوب و در صورت لزوم ، تعیین خواص ریخت شناسی و بیوشیمیایی میکروارگانیسم های شناسایی شده و شمارش آنها است.

این روش برای موارد زیر در نظر گرفته شده است:

ایجاد انطباق شاخص های میکروبیولوژیکی با کیفیت غذا و محصولات شیر پرورشی ، کشت های اولیه ، کنسانتره های باکتریایی و آماده سازی های باکتریایی باکتری های اسید لاکتیک با الزامات مستندات قانونی و فنی ؛

ایجاد ناباروری صنعتی کنسرو ؛

روشن شدن علل نقص در محصولات غذایی.

1. نمونه برداری و آماده سازی نمونه ها

1.1 نمونه برداری و تهیه نمونه های غذایی ، به جز شیر تخمیر شده - مطابق GOST 26668 ، GOST 26669.

نمونه برداری از محصولات شیر تخمیر شده (خشک و مایع) ، کشت های اولیه ، کنسانتره های باکتریایی و آماده سازی های باکتریایی باکتری های اسید لاکتیک و آماده سازی آنها برای تجزیه و تحلیل - مطابق با GOST 9225 *.
________________
GOST R 53430-2009.

1.2 مواد غذایی کنسرو شده از نظر تنگی بررسی می شوند - مطابق با GOST 8756.18.

کنسروهای کامل ، از نظر ظاهری طبیعی ، قبل از آزمایش ، در ظروف با ظرفیت حداکثر تا 1 dm3 ، شامل ، حداقل به مدت 5 روز ، در ظروف با ظرفیت بیش از 1 dm3 - حداقل در دمای 30-37 درجه سانتی گراد حرارت داده می شوند. 7 روز.

محصولات غذایی که تعداد میکروارگانیسم های اسید لاکتیک در آنها استاندارد است ، تحت کنترل درجه حرارت نیستند.

رقیق سازی محصولات در محلول پپتون-نمک مطابق با GOST 26669 تهیه می شود.

رقیق سازی اولیه محصولات با کسر جرمی NaCl بیش از 5 using با استفاده از آب پپتون تهیه می شود. رقیق سازی اولیه ماهی و فرآورده های گوشتی با استفاده از نمک تهیه می شود.

2. ظاهر ، مواد و واکنش ها

برای آزمایش ، از تجهیزات ، مواد ، معرفها مطابق با GOST 10444.1 ، GOST 9225 و موارد زیر استفاده کنید:

GOST 24104 *، با بیشترین محدودیت وزن تا 200 گرم و حد تحمل 2 میلی گرم for (برای وزن گیری معرف ها) ؛
________________
GOST 24104-2001 GOST R 53228-2008.

مقیاسهای آزمایشگاهی برای استفاده عمومی با مشخصات اندازه شناسی مطابق با GOST 24104 *، با حداکثر محدودیت وزن تا 200 گرم و حد تحمل 15 میلی گرم ((برای وزن محصول) ؛
________________
* از 1 ژوئیه 2002 ، GOST 24104-2001 اجرا شده است. GOST R 53228-2008 در قلمرو فدراسیون روسیه در حال اجرا است.

میکروسکوپ نوری بیولوژیکی با دستگاهی برای میکروسکوپ کنتراست فاز یا سایر مارک های مشابه ؛

پوشش ها مطابق با GOST 6672 ؛

عینک های شیئی مطابق با GOST 9284 ؛

یک ترموستات با محدوده دمای کار 28-55 درجه سانتی گراد ، که اجازه می دهد تا دمای تنظیم شده با خطای ± 1 درجه سانتیگراد حفظ شود.

شاخه های چوب پنبه مطابق با GOST 5541 ؛

ذره بین جیبی تاشو با بزرگنمایی 4-10 برابر مطابق با GOST 25706 ؛

پانکراتین برای داروهای باکتریایی و ویروسی ؛

کلروفرم فنی مطابق با GOST 20015 ؛

شیر بدون چربی با اسیدیته بیش از 19 درجه T ، بدست آمده از شیر گاو که کمتر از درجه 2 مطابق با GOST 13264 *تهیه نشده است ، یا شیر خشک بدون چربی مطابق با GOST 10970 ** ؛
________________
* در قلمرو فدراسیون روسیه ، GOST R 52054-2003 در حال اجرا است.
** در قلمرو فدراسیون روسیه ، GOST R 52791-2007 در حال اجرا است.

L- آرژنین هیدروکلراید ؛

بنزیدین پایه یا اسید کلریدریک ؛

سیترات پتاسیم ؛

کربوکسی متیل سلولز ؛

دوقلو -80؛

استات سدیم ؛

سیترات آمونیوم ؛

سولفات منیزیم (MgSO 7HO) ؛

سولفات منگنز (MnSO 2HO) ؛

سولفات منگنز (MnSO 4HO) ؛

اسید سوربیک ؛

نیگروزین ؛

فنول

3. آماده سازی برای آزمایش

3.1.1 نشانگر بنفش برمکرزول ، محلول با غلظت جرمی 1 گرم در متر مکعب: 0.1 گرم بنفش برومکرزول ، مطابق با قوانین آسپسی ، با شستشو با آب مقطر استریل ، به یک لیوان حجمی با ظرفیت 100 میلی لیتر منتقل می شود و حجم با همان آب به علامت می رسد. محلول بیش از 3 ماه در دمای اتاق نگهداری نمی شود.

3.1.2 کربنات کلسیم ، یک سوسپانسیون آبی با غلظت جرمی 30 گرم در متر مکعب: 3 گرم کربنات کلسیم استریل شده مطابق با GOST 10444.1 ، انتقال ، شستشو با آب مقطر ، به یک شیشه حجمی با ظرفیت 100 میلی لیتر ، حجم را به علامت. سوسپانسیون در دمای (1 12 121) درجه سانتی گراد به مدت 20 دقیقه استریل می شود. سوسپانسیون بیش از 3 ماه در دمای اتاق نگهداری نمی شود.

3.1.3 کاربولفوکسین ، محلول غلیظ: 1 گرم فوکسین با 10 سانتی متر 96٪ الکل اتیل و 100 سانتی متر محلول فنول با غلظت جرمی 50 گرم در متر مربع 3 مخلوط می شود.

برای تهیه محلول کاربولفوکسین ، 90 سانتی متر آب مقطر به 10 سانتی متر محلول غلیظ کاربولفوکسین اضافه می شود.

3.1.4 محلول بنفش کریستالی با غلظت جرمی 10 گرم در متر مربع 3: 1 گرم بنفش کریستالی منتقل می شود و با آب مقطر شستشو داده می شود و به یک لیوان حجمی با ظرفیت 100 میلی لیتر می رسد و حجم آن تا حد مجاز افزایش می یابد. محلول بیش از 3 ماه در دمای اتاق نگهداری نمی شود.

3.1.5 سوسپانسیون نیکروزین غلظت جرمی 100 گرم در متر مکعب 3: 10 گرم نیگروسین منتقل می شود ، با آب مقطر شسته می شود ، به یک لیوان حجمی با ظرفیت 100 سانتی متر مکعب می رسد ، حجم را به علامت می رسانند ، تا دمای 45-50 گرم می شود. درجه سانتی گراد در حمام آب ، سپس از طریق فیلتر پنبه و گاز فیلتر می شود.

3.1.6 محلول پپتون-نمک مطابق با GOST 26669 تهیه می شود.

3.1.7 آب پپتون مطابق با GOST 26669 تهیه شده است.

3.1.8 اسید سوربیک ، محلول قلیایی: 1 گرم اسید سوربیک منتقل می شود ، با محلول هیدروکسید سدیم NaOH = 1 mol / dm3 شستشو می شود ، در یک شیشه حجمی با ظرفیت 100 میلی لیتر ، حجم را با همان محلول به علامت می رسانند. محلول حاصله مطابق با GOST 26670 با فیلتراسیون غشایی استریل می شود.

مجاز است که محلول اسید سوربیک را بدون فیلتراسیون مطابق با قوانین آسپسی تهیه کنید ، در حالی که محلول هیدروکسید سدیم در آب مقطر استریل آماده می شود.

3.1.9 معرف برای تعیین سیتوکروم ها: 1 گرم بنزیدین یا اسید کلریدریک پایه در 20 سانتی متر اسید استیک یخچالی 99.8٪ حل می شود ، 30 سانتی متر آب مقطر اضافه شده و به آرامی گرم می شود ، پس از سرد شدن ، 50 سانتی متر 96٪ اتیل الکل اضافه می شود. به راه حل محلول را به مدت 1 ماه در یخچال نگهداری کنید.

3.1.10 محلول فیزیولوژیکی مطابق با GOST 10444.1 تهیه شده است.

3.2.1 محیط Blikfeldt متراکم مطابق با GOST 10444.1 تهیه شده است.

3.2.2 محیط Blikfeldt مایع است: 10 گرم لاکتوز ، 10 گرم گلوکز ، 5 گرم پپتون در 950 cm3 آب مقطر حل شده ، جوشانده و از طریق فیلتر کاغذی فیلتر می شود. به فیلتراسیون ، 20 سانتی متر عصاره مخمر ، 32 سانتی متر محلول بنفش برومکرزول مطابق بند 3.1.1 اضافه کنید ، pH را روی 0.1 ± 7.3 تنظیم کنید ، در لوله های استریل بریزید و در دمای (1 11 117) درجه استریل کنید. C به مدت 20 دقیقه.

3.2.3 چهارشنبه بریگز ، اصلاح شده توسط شارپ:

در 875 سانتیمتر آب مقطر ، 15 گرم پپتون ، 20 گرم گلوکز ، 25 سانتیمتر عصاره مخمر ، 5 گرم استات سدیم ، 5 گرم فسفات پتاسیم تک جایگزین ، 2 گرم سیترات آمونیوم ، 100 سانتی متر آب گوجه فرنگی (با فرض اینکه آب میوه کمتر از 4.5 sol جامدات محلول ندارد ، اگر آب گوجه فرنگی حاوی مقدار متفاوتی از مواد جامد باشد ، سپس برای محتویات جامد 4.5 درصد مجدد محاسبه کنید) ، 1 سانتی متر Tween -80 ، 5 سانتی متر محلول نمک (MgSO 7NO - 11.5 g ، MnSO · 4HO - 2.86 گرم ، FeSO · 7HO - 0.68 گرم ، آب مقطر تا 100 سانتی متر) ، 15 گرم آگار.

مخلوط را روی حرارت ملایم می جوشانیم تا آگار کاملاً حل شود. pH را طوری تنظیم کنید که پس از عقیم سازی در دمای 25 درجه سانتی گراد (0.1 ± 6.5) قرار گیرد. محیط در دمای (1 115 115) درجه سانتی گراد به مدت 15 دقیقه استریل می شود.

3.2.4 محیط مخمر: در 100 سانتی متر عصاره مخمر تهیه شده مطابق با GOST 10444.1 ، 900 سانتی متر آب مقطر ، 10 گرم کربنات کلسیم استریل شده مطابق با GOST 10444.1 و 100 گرم ساکارز اضافه کنید. مخلوط حرارت داده می شود تا ساکارز حل شود ، pH به گونه ای تنظیم می شود که پس از عقیم سازی در دمای 25 درجه سانتی گراد (0.1 ± 7.1)) قرار گیرد ، در لوله های 10 سانتی متری ریخته و در دمای (1 12 121 °) درجه سانتی گراد به مدت 15 درجه استریل می شود. دقیقه

3.2.5 محیط کلم آگار مطابق با GOST 10444.1 تهیه شده است.

3.2.6 محیط MRS مایع است: 10 گرم پپتون ، 20 سانتی متر عصاره مخمر ، 20.0 گرم گلوکز ، 1.0 سانتی متر Tween-80 ، 2.0 گرم پتاسیم فسفات ، 5.0 گرم استات سدیم در یک فلاسک حجمی با ظرفیت قرار داده می شود. 1.0 dm3 ، 2.0 گرم سیترات تری آمونیوم ، 0.2 گرم سولفات منیزیم ، 0.05 گرم سولفات منگنز (MnSO 4HO) ، آب گوشت را به علامت اضافه کنید. اجزا را با حرارت دادن در حمام آب حل کرده و pH را طوری تنظیم کنید که پس از عقیم سازی در دمای 25 درجه سانتی گراد (0.1 ± 6.2) قرار گیرد. این ماده در لوله های استریل ، هر کدام 10 سانتی متر ریخته می شود و در اتوکلاو در دمای (1 12 121) درجه سانتی گراد به مدت 15 دقیقه استریل می شود. لوله ها را با محیط کشت در دمای (1 4 4) درجه سانتی گراد به مدت بیش از 30 روز نگهداری کنید.

3.2.7 MRS agar مطابق دستورالعمل مشخص شده در بند 3.2.6 با افزودن 15-18 گرم آگار تهیه می شود. پس از حل شدن اجزاء ، محیط را داخل فلاسک های استریل می ریزند و در اتوکلاو در دمای (1 12 121) درجه سانتی گراد به مدت 15 دقیقه استریل می کنند. محیط آماده شده در دمای (1 4 4) درجه سانتی گراد بیش از 30 روز نگهداری می شود.

در صورت لزوم ، برای افزایش گزینش ، پس از عقیم سازی ، 1 میلی لیتر محلول قلیایی اسید سوربیک مطابق بند 3.1.8 به 1 متر مکعب محیط آگارزه یا مایع اضافه می شود.

3.2.8 آب گوشت متوسط پپتون pH 9.6:

در آبگوشت گوشت-پپتون تهیه شده مطابق با GOST 10444.1 ، pH با استفاده از محلول های قلیایی و اسیدی مطابق با GOST 10444.1 تنظیم می شود به طوری که پس از عقیم سازی 9.6 در 25 درجه سانتی گراد است. محیط در دمای (1 12 121 °) درجه سانتی گراد به مدت 20 دقیقه استریل می شود.

3.2.9 آبگوشت متوسط گوشت-پپتون با محتوای کلرید سدیم 6.5 in مطابق با GOST 10444.1 تهیه می شود ، اما در طول آماده سازی ، مقدار کلرید سدیم اضافه شده به 65 گرم در 1 dm 3 از محیط افزایش می یابد.

3.2.10 محیط مغذی ساکارز آگار:

100.0 گرم ساکارز ، 15.0 گرم آگار به 1 لیتر آب گوشت-پپتون اضافه می شود ، گاهی اوقات هم می زنیم ، مخلوط تا جوش حرارت داده می شود و همه اجزای آن کاملاً حل می شوند.

محیط تا دمای 55-45 درجه سانتی گراد سرد می شود و pH به گونه ای تنظیم می شود که پس از عقیم سازی در دمای 25 درجه سانتی گراد (0.1 ± 7.1) قرار گیرد.

محیط را داخل فلاسک ها ریخته و به مدت 15 دقیقه در دمای (1 12 121) درجه سانتیگراد استریل می شود. پس از عقیم سازی و بررسی pH ، محیط به خوبی مخلوط شده و در ظروف پتری ریخته می شود و در دمای (1 4 4) درجه سانتی گراد بیش از 14 روز نگهداری نمی شود.

3.2.11. محیط ردی: اساس محیط - 15.0 گرم آگار به یک فلاسک حاوی 500 میلی لیتر آب مقطر اضافه شده و در حمام آب گرم می شود تا زمانی که آگار حل شود. به یک فلاسک دیگر حاوی 500 میلی لیتر آب مقطر ، 10.0 گرم سیترات پتاسیم و 15.0 گرم کربوکسی متیل سلولز اضافه کرده و با حرارت دادن حل کنید. محتویات هر دو فلاسک مخلوط شده و 3.0 گرم پپتون ، 25 سانتیمتر عصاره مخمر ، 1.25 گرم فسفات پتاسیم نامحلول ، 5.0 گرم هیدروکلراید L-arginine اضافه می شود ، در حمام آب گرم می شود تا اجزای آن کاملاً حل شوند و سرد می شوند. درجه حرارت 45-55 درجه سانتی گراد و pH را طوری تنظیم کنید که پس از عقیم سازی در 25 درجه سانتی گراد (0.2 ± 6.3) باشد. پایه محیط در دمای (1 12 121 °) درجه سانتی گراد به مدت 15 دقیقه استریل می شود و بیش از 30 روز در دمای (1 4 4) درجه سانتی گراد نگهداری نمی شود.

برای تهیه محیط تغذیه ای ، 5.0 سانتی متر مکعب شیر بدون چربی استریل ، 100 سانتی متر مکعب کربنات کلسیم با غلظت جرمی 30 گرم در متر مکعب و 2 سانتی متر مکعب محلول بنفش برومکرزول با غلظت جرمی 1 گرم در متر مکعب اضافه می شود. تا 1 dm3 پایه ذوب شده و تا دمای 55-55 درجه سانتیگراد سرد می شود.

3.2.12. مایع روگوسا: 10.0 گرم پپتون ، 25.0 سانتی متر عصاره مخمر ، 20.0 گرم گلوکز ، 1.0 سانتی متر Tween-80 ، 6.0 گرم فسفات پتاسیم تک جایگزینی در یک فلاسک حجمی با ظرفیت 1.0 دسی بل ، 2 ، 0 گرم قرار می گیرد. سیترات آمونیوم ، 25.0 گرم استات سدیم ، 1.32 سانتی متر اسید استیک یخبندان ، 0.575 گرم سولفات منیزیم ، 0.12 گرم سولفات منگنز (MnSO 2HO) ، 0.034 گرم سولفات آهن ، آب مقطر را به علامت اضافه کنید ، اجزای گرم کننده را حل کنید در حمام آب و pH را طوری تنظیم کنید که پس از عقیم سازی در دمای 25 درجه سانتی گراد (0.1 ± 5.4) قرار گیرد. این ماده در لوله های آزمایش استریل ، هر کدام 10 سانتی متر ریخته می شود و در اتوکلاو در دمای (1 12 121 °) درجه سانتی گراد به مدت 15 دقیقه استریل می شود. لوله ها را با محیط کشت در دمای (1 4 4) درجه سانتی گراد به مدت بیش از 30 روز نگهداری کنید.

3.2.13. محیط روگوسای آگارزه طبق دستورالعمل توصیف شده در بند 3.2.12 با افزودن 20.0 گرم آگار تهیه می شود. پس از حل شدن اجزاء ، محیط را در فلاسک های استریل ریخته و در اتوکلاو در دمای (1 12 121 °) درجه سانتی گراد به مدت 15 دقیقه استریل می کنیم. محیط آماده شده در دمای (1 4 4) درجه سانتی گراد بیش از 30 روز نگهداری می شود.

3.2.14 محیط آب گوجه فرنگی مطابق با GOST 10444.1 تهیه شده است.

3.2.15 محیط برای تعیین pseudocatalase: 5.0 * پپتون ، 25 سانتی متر عصاره مخمر ، 0.5 سانتی متر Tween-80 ، 0.1 گرم (MnSO 4HO) ، 0.5 گرم گلوکز ، 15 گرم آگار در یک فلاسک حجمی با ظرفیت 1 لیتر آب گوشت پپتون را به علامت اضافه کنید ، اجزا را با گرم کردن در حمام آب حل کرده و pH را طوری تنظیم کنید که پس از عقیم سازی در دمای 25 درجه سانتی گراد (0.1 ± 6.9) قرار گیرد. محیط در لوله های آزمایش 5-7 سانتی متر ریخته می شود و در اتوکلاو در دمای (1 12 121) درجه سانتی گراد به مدت 15 دقیقه استریل می شود. پس از عقیم سازی ، لوله ها روی سطحی شیب دار قرار می گیرند تا گیر بیفتد.
________________
* متن سند با اصل مطابقت دارد. - یادداشت از سازنده پایگاه داده.

3.2.16. چهارشنبه لی:

بر اساس محیط - 10.0 گرم پپتون ، 50 سانتی متر عصاره مخمر ، 5.0 گرم لاکتوز ، 3.0 گرم کربنات کلسیم استریل شده مطابق GOST 10444.1 ، 0.5 گرم NaHPO ، 18 گرم آگار در یک فلاسک حجمی با یک ظرفیت 1 dm 3 ، آب مقطر را به علامت اضافه کنید ، اجزاء را با گرم کردن در حمام آب حل کرده و pH را طوری تنظیم کنید که پس از عقیم سازی در دمای 25 درجه سانتی گراد (1 7 7.0) قرار گیرد. محیط در اتوکلاو در دمای (1 12 121 °) درجه سانتی گراد به مدت 20 دقیقه استریل می شود و در صورت لزوم ، در دمای (1 4 4) درجه سانتی گراد بیش از 30 روز نگهداری نمی شود.

برای تهیه محیط تغذیه ای ، 20 میلی لیتر محلول استریل بنفش برومکرزول با غلظت جرمی 1 گرم در متر مکعب به 1 متر مکعب از پایه اضافه شده ، مخلوط شده و در ظروف پتری ریخته می شود. این محیط در دمای (1 4 4) درجه سانتی گراد حداکثر 7 روز نگهداری می شود.

3.3.1 تهیه شیر هیدرولیز شده

شیر بدون چربی طبیعی یا بازسازی شده به مدت 20 دقیقه جوشانده یا با بخار جاری تمیز می شود و تا دمای (2 45 45) درجه سانتی گراد سرد می شود. اسیدیته فعال با افزودن محلول آبی با کسر جرمی NaOH 40٪ به pH (1/7 7. 7/7) رسانده می شود. از 0.5 تا 1.0 گرم پودر پانکراتین به 1000 سانتی متر مکعب شیر اضافه می شود. سپس 5 تا 6 سانتی متر مکعب کلروفرم به شیر اضافه کنید. فلاسک با درپوش چوب پنبه بسته می شود و در دمای (2 40 40) درجه سانتی گراد به مدت 18-24 ساعت نگهداری می شود. در 3-5 ساعت اول ، شیر 2-3 بار هم زده می شود (چوب پنبه پس از کمی باز می شود. هم بزنید تا کلروفرم حذف شود).

سپس شیر هیدرولیز شده از طریق فیلتر کاغذی فیلتر شده و با آب مقطر به نسبت 1: 1 رقیق می شود ، اسیدیته فعال با افزودن محلول آبی با کسر جرمی NaOH 40٪ و pH (0.1 ± 7.1) تنظیم می شود. برای تهیه آگار با شیر هیدرولیز استفاده می شود. در صورت ذخیره ، شیر هیدرولیز شده در اتوکلاو در دمای 121 ° C ± 1 ° C به مدت 15 دقیقه استریل می شود.

3.3.2 آماده سازی شیر هیدرولیز شده آگار

ترکیب:


شیر هیدرولیز شده ، سانتی متر

15 گرم آگار را به 1000 میلی لیتر شیر هیدرولیز شده اضافه کنید. محیط را تا زمانی که آگار کاملاً ذوب شده و از طریق پشم پنبه فیلتر می شود ، گرم کرده و داخل لوله های آزمایش یا فلاسک ها ریخته و در اتوکلاو در دمای (1 12 121 °) درجه سانتیگراد (10 ± 1) دقیقه استریل می شود.

3.3.3. تهیه شیر بدون چربی استریل

شیر بدون چربی طبیعی یا بازسازی شده در لوله های 10 سانتی متری ریخته می شود و در دمای (1 12 121 °) درجه سانتیگراد (1 10 10) دقیقه استریل می شود.

4. انجام آزمایش

4.1.1 برای تعیین میکروارگانیسم ها ، از نمونه آماده شده محصول یا رقت اولیه آن استفاده کنید.

برای تعیین حضور و شمارش تعداد میکروارگانیسم ها روی ظروف پتری ، تعدادی رقت از یک نمونه غذا یا از رقت اولیه مطابق با تعداد مجاز میکروارگانیسم های مشخص شده در اسناد قانونی و فنی برای نوع خاصی از غذا تهیه می شود. تولید - محصول.

برای محاسبه NSP ، رقت اولیه و تعدادی ده برابر از نمونه محصول غذایی تهیه می شود تا میکروارگانیسم ها در محصولات با بیشترین رقت شناسایی نشوند. برای کاشت ، حداقل سه رقت متوالی را انتخاب کنید. سه لوله موازی از هر رقت تلقیح می شود.

4.1.2 برای کاشت در محیط مایع به روش NHF و روی ظروف پتری به روش عمق ، 1.0 سانتی متر از نمونه آماده شده محصول و (یا) رقیق شدن آن را ، برای کاشت روی ظروف پتری به روش سطحی - 0.1-0.2 سانتی متر هرکدام به

کاشت با روشهای عمیق یا سطحی ، و همچنین با استفاده از فیلتراسیون غشایی ، مطابق با GOST 26670 انجام می شود.

هنگام استفاده از روش فیلتر غشایی ، حجم یک محصول مایع فیلتر می شود ، که در اسناد قانونی و فنی برای نوع خاصی از محصولات غذایی نشان داده شده است.

4.1.3 برای تعیین وجود یا شمارش NSP میکروارگانیسم های اسید لاکتیک ، تلقیح بر روی یکی از محیط های مایع مشخص شده در بندهای 3.2.2 ، 3.2.6 یا 3.2.12 انجام می شود.

اگر پس از افزودن محصول به محیط بلیکفلد ، محیط تغییر رنگ داد ، چند قطره محلول قلیایی استریل (NaOH یا KOH) با غلظت جرمی 50 گرم در متر مکعب به آن اضافه می شود تا رنگ اصلی بازیابی شود.

برای تعیین حضور یا شمارش تعداد میکروارگانیسم های اسید لاکتیک ، بجای کاشت در محیط مایع ، اجازه داده می شود که کاشت را به روش عمیق در یکی از محیط های آگار مشخص شده در بندهای 3.2.1 ، 3.2.5 ، 3.2 انجام دهید. 7 ، 3.2.13 یا 3.2.14

برای تعیین وجود یا شمارش NSPs باکتریهای جنس لاکتوباسیلوس ، تلقیح بر روی یکی از محیطهای مایع مشخص شده در بندهای 3.2.6 یا 3.2.12 انجام می شود.

برای تعیین حضور یا شمارش تعداد باکتریهای جنس لاکتوباسیلوس ، تلقیح به جای تلقیح در محیط مایع ، به روش عمیق در یکی از محیطهای آگار مشخص شده در بندهای 3.2.7 یا 3.2.13 انجام می شود.

برای تعیین وجود باکتری های جنس Leuconostoc ، تلقیح روی محیط مایع مشخص شده در بند 3.2.4 انجام می شود.

برای تعیین حضور به جای استفاده از محیط مایع و همچنین شمارش تعداد باکتری های جنس Leuconostoc روی ظروف پتری یا استفاده از روش فیلتراسیون غشایی ، تلقیح سطحی بر روی محیط آگار مشخص شده در بند 3.2.10 انجام می شود.

برای تعیین حضور یا شمارش تعداد استرپتوکوکهای گروه N از جنس استرپتوکوک ، تلقیح با روش غوطه ور در محیط آگار مشخص شده در بند 3.2.11 و برای S. thermophilus ، محیط مطابق بند 3.2.16 انجام می شود. استفاده می شود.

برای تعیین حضور یا شمارش تعداد باکتری های جنس Pediococcus ، تلقیح با روش عمیق در محیط آگار مشخص شده در بند 3.2.3 انجام می شود.

4.1.4 محصولات برای تعیین حضور یا شمارش تعداد میکروارگانیسم های اسید لاکتیک ، باکتری های جنس لاکتوباسیلوس استرپتوکوکهای گروه N از جنس استرپتوکوکوس بیش از 5 روز در دمای (1 30 30) درجه سانتی گراد یا بیشتر انکوبه نمی شوند. بیش از 3 روز در دمای (1 37 37) درجه سانتی گراد ؛ تلقیحات برای تعیین حضور یا شمارش تعداد باکتری های جنس Leuconostoc حداکثر 5 روز در دمای (1 22 22) درجه سانتیگراد انکوبه می شوند. تلقیحات برای تعیین حضور یا شمارش تعداد S. thermophilus (3 48 48) ساعت در دمای (1 45 45) درجه سانتیگراد انکوبه می شوند. تلقیح روی ظروف پتری برای تعیین وجود یا شمارش تعداد باکتری های جنس Leuconostoc به صورت وارونه انکوبه می شود.

جوجه کشی محصولات در محیط مایع هنگامی که علائم رشد قابل مشاهده ظاهر می شود متوقف می شود.

شمارش اولیه مستعمرات بر روی محیط آگار پس از 48 ساعت انجام می شود.

4.1.5 در محصولات روی محیط کشت آگار برای تعیین حضور یا شمارش تعداد میکروارگانیسم های اسید لاکتیک ، باکتری های جنس لاکتوباسیلوس ، پدیوکوکوس استرپتوکوک های گروه N از جنس استرپتوکوکوس ، S. thermophilus ، محدودیت دسترسی طبق GOST 30425 یا یکی از روشهای زیر:

روی ماده مغذی جامد شده در ظروف پتری ، لایه دوم ماده ذوب شده و سرد شده را در محیط آگار (1 45 45) درجه سانتی گراد به میزان 5.0 سانتی متر بریزید و بگذارید تا جامد شود.

ظروف پتری در یک فضای گازی متشکل از 95٪ N و 5٪ CO قرار می گیرند.

ظروف پتری در یک دستگاه هواساز قرار می گیرند. دستگاه بسته است ، با استفاده از پمپ خلاء خلاء 86.6-93.3 kPa ایجاد می شود.

پارافین مایع استریل به هر لوله با یک مایع مایع به مقدار لازم برای به دست آوردن ستونی به ارتفاع حدود 2 سانتی متر اضافه می شود.

4.1.7 تلقیح روی محیط آگار پس از انکوباسیون مورد بررسی قرار می گیرد و ظروف پتری برای شمارش انتخاب می شوند ، که از 15 تا 150 کلونی مشخصه روییده است.

هنگام تعیین تعداد میکروارگانیسم ها با روش فیلترهای غشایی ، مجاز است که ظروف پتری را برای شمارش انتخاب کنید اگر کمتر از 15 کلنی مشخصه روی فیلترها رشد کرده باشد.

مشخصات مستعمرات معمولی در پیوست 2 آورده شده است.

4.1.8 برای تأیید اینکه مستعمرات مشخصه متعلق به میکروارگانیسم های اسید لاکتیک یا باکتری های یکی از جنس های Lactobacillus ، Leuconostoc ، Pediococcus ، استرپتوکوک های گروه N از جنس Streptococcus ، S. thermophilus هستند ، حداقل 5 کلنی مشخصه از محصولات طبق بند 4.1 انتخاب شده است. .7 یا 4.1.6 تعلق هر مستعمره انتخابی به میکروارگانیسم های خاص در ارتباط با لکه گرم ، تحرک ، وجود کاتالاز ، علاوه بر این ، هنگام شناسایی باکتری های جنس Leuconostos ، هنگام شناسایی استرپتوکوک ها S. pH 9.6 ، وجود کپسول ها مشخص می شود. و آبگوشت مزوپاتامیا با 5/6 درصد NaCl.

4.1.8.3. فعالیت کاتالاز فرهنگها مطابق با GOST 30425 تعیین می شود.

نتایج تعیین فعالیت کاتالاز مطابق ضمیمه 1 ارزیابی می شود.

تجزیه پراکسید هیدروژن در باکتریهای جنس Pediococcus به دلیل آنزیم pseudocatalase امکان پذیر است. بنابراین ، هنگام تعیین میکروارگانیسم های اسید لاکتیک یا باکتری های جنس Pediococcus ، اگر میکروارگانیسم های گرم مثبت و بی حرکت که واکنش کاتالاز مثبت را نشان می دهند در کلنی های مشخص یافت می شوند ، با تعیین آزمایش بنزیدین ، عدم وجود سیتوکروم ها را کنترل کنید. برای انجام این کار ، کلنی های باکتری های 24 تا 48 ساعته روی ظروف پتری با محلول بنزیدین مشخص شده در بند 3.1.9 ریخته می شوند. پس از اشباع محلول کلنی ها ، تقریباً همان حجم 5 درصد پراکسید هیدروژن را به ظرف اضافه کنید. میکروارگانیسم های اسید لاکتیک ، از جمله باکتری های جنس Pediococcus ، حاوی سیتوکروم نیستند. در صورت وجود سیتوکروم ها ، کلنی ها سبز مایل به آبی یا آبی روشن هستند.

در صورت عدم وجود بنزیدین ، مجاز است حضور pseudocatalase را در محیط بند 3.2.15 با غلظت گلوکز پایین 0.05 determine تعیین کنید.

محصولات مطابق با بند 4.1.4 انکوبه می شوند ، تعیین pseudocatalase همانند کاتالاز مطابق GOST 30425 انجام می شود.

فرهنگ هایی که pseudocatalase را تشکیل می دهند متعلق به جنس Pediococcus هستند.

4.1.8.4. هنگام شناسایی باکتری های جنس Leuconostoc ، آماده سازی و رنگ آمیزی با توجه به Buri برای شناسایی کپسول های باکتری انجام می شود. برای انجام این کار ، یک قطره از یک کشت باکتریایی با یک پودر ریز جوهر سیاه یا یک سوسپانسیون نیگروسین بر روی یک اسلاید میکروسکوپ با چربی و چربی خوب مخلوط می شود.

با کمک یک لیوان دیگر با لبه های صیقلی ، یک اسمیر نازک به سرعت آماده می شود ، که با چندین بار عبور از شعله مشعل ثابت می شود. اسمیر با محلول بنفش کریستالی یا محلول کاربولفوکسین رنگ آمیزی می شود. در ظرفی را با آب شستشو دهید ، در هوا بگذارید تا خشک شود و به صورت میکروسکوپی انجام شود. مجاز نیست که اسمیر را بین ورقه های کاغذ صافی خشک کنید. زمینه آماده سازی با یک سوسپانسیون نازک از جوهر سیاه یا نیگروزین رنگ آمیزی شده است. بدنه باکتریها تک رنگ هستند ، کپسولها بدون لکه باقی می مانند.

4.1.8.5. هنگام شناسایی استرپتوکوکهای گروه N از جنس Streptococcus ، استرپتوکوکهای گونه S. thermophilus ، عدم رشد روی آب گوشت-پپتون با pH 9.6 و در آب گوشت پپتون با محتوای کلرید سدیم 6.5 determined تعیین می شود.

برای این منظور ، فرهنگها طبق بند 4.1.8 در رسانه های مشخص شده در بندهای 3.2.8 و 3.2.9 خرده فرهنگ می شوند.

تلقیح ها در دمای (1 30 30) درجه سانتی گراد به مدت 3 روز انکوبه می شوند و هنگامی که S. thermophilus شناسایی می شود ، تلقیح ها در (1 45 45) درجه سانتی گراد به مدت 3 روز انکوبه می شوند.

4.2.1 تهیه رقتهای فرآورده های شیر تخمیر شده (خشک و مایع) مطابق با GOST 9225.

برای آماده سازی رقیق کننده های اولیه ، کنسانتره های باکتریایی و آماده سازی باکتریایی باکتری های اسید لاکتیک ، لبه های بطری و کیسه با الکل پاک می شود ، لبه بطری سوخته و چوب پنبه برداشته می شود ، لبه کیسه با قیچی های پروفیل شده ، 1 گرم از ماده آزمایش شده را در یک ملات استریل یا پروفیل پوشانده شده با یک ظرف استریل یا کاغذ درپوش وزن کرده ، کاملاً مالش دهید ، مقدار کمی محلول کلرید سدیم یا بافر فسفات را از یک فلاسک حاوی 99 میلی لیتر محلول یا بافر مواد معلق را با یک محلول باقی مانده از کلرید سدیم یا بافر فسفات در یک فلاسک ریخته و رقت دوم 1: 100 به دست می آید.

از دومین رقیق سازی فرآورده های شیر تخمیر شده ، کشت های اولیه ، کنسانتره های باکتریایی و آماده سازی های باکتریایی باکتری های اسید لاکتیک ، رقیق سازی های زیر مطابق با تعداد باکتری های اسید لاکتیک مشخص شده در مستندات قانونی و فنی ، با استفاده از جدول 1 تهیه می شود.

میز 1


نام محصول	رقیق کننده های مورد استفاده برای کاشت
نوشیدنی های شیر تخمیر شده ، فرهنگ شروع کننده مایع و خشک ، پنیر خامه ای ، خامه ترش	10; 10; 10; 10
کنسانتره های باکتریایی ، آماده سازی باکتریایی باکتری های اسید لاکتیک
محصولات شیر تخمیر شده خشک

4.2.2 تلقیح برای شمارش تعداد استرپتوکوک های اسید لاکتیک در یک ماده غذایی آگار یا مایع تهیه شده مطابق با بندهای 3.3.2 و 3.3.3 و تلقیح برای شمارش تعداد چوب های اسید لاکتیک - در یک محیط مایع تهیه شده مطابق با بند 3.3.3

برای تلقیح در محیط مغذی آگار ، این رقت ها انتخاب می شوند ، هنگامی که روی صفحات 15 تا 150 کلونی تلقیح می شوند.

هر نمونه مطابق با GOST 9225 1 سانتی متر از رقیق سازی محصول مربوطه (جدول 1 را ببینید) روی ظروف پتری تلقیح می شود.

هنگامی که از سه تا چهار رقت گذشته به محیط تغذیه مایع تلقیح می شود (جدول 1 را ببینید) ، 1 سانتی متر از هر رقت به دو لوله موازی با شیر بدون چربی استریل اضافه می شود.

4.2.3 لوله های آزمایش یا ظروف پتری را با تلقیح در یک ترموستات قرار داده و برای شمارش باکتری های اسید لاکتیک مزوفیلیک ، در دمای (1 40 40) درجه سانتی گراد برای شمارش باکتری های ترموفیلیک اسید لاکتیک و در دمای (1 30 30) درجه سانتیگراد انکوبه کنید. (1 32 32) ° C برای شمارش مشترک باکتری های اسید لاکتیک مزوفیل و ترموفیلیک. محصولات به مدت 72 ساعت در انکوبه قرار می گیرند.

5. پردازش نتایج

5.1.1 نتایج تجزیه و تحلیل محصول غذایی برای هر نمونه به طور جداگانه ارزیابی می شود.

5.1.2 اگر هنگام مطالعه خواص فرهنگی ، ریخت شناسی و بیوشیمیایی ، هنگام تعیین:

میکروارگانیسم های اسید لاکتیک میله های گرم مثبت ، بی حرکت ، کاتالاز منفی یا غیر اسپور ، گرم مثبت ، بی حرکت ، کاتالاز منفی یا شبه کاتالاز تشکیل می دهند ، سپس نتیجه می گیرند که میکروارگانیسم های شناسایی شده اسید لاکتیک هستند.

باکتری های جنس لاکتوباسیلوس میله های بدون اسپور ، گرم مثبت ، بی حرکت ، کاتالاز منفی پیدا کردند ، سپس نتیجه گرفتند که میکروارگانیسم های شناسایی شده متعلق به جنس لاکتوباسیلوس هستند.

باکتریهای جنس Leuconostoc بدون اسپور ، گرم مثبت ، بی حرکت ، کاتالاز منفی ، در محاصره کپسول کوکی یافت می شوند ، سپس نتیجه می گیرند که میکروارگانیسمهای یافت شده متعلق به جنس Leuconostoc هستند.

مشخص شد که باکتریهای جنس استرپتوکوکوس گروه N غیر اسپور ، گرم مثبت ، بی حرکت ، کاتالاز منفی هستند ، در محیطهای مغذی با pH 9.6 و 6.5٪ NaCl ، کوک رشد نمی کنند ، سپس به این نتیجه می رسند که میکروارگانیسمهای تشخیص داده شده متعلق به جنس استرپتوکوک گروه N است.

آنها باکتری های جنس Pediococcus را پیدا کردند که بدون اسپور ، گرم مثبت ، بی حرکت ، کاتالاز منفی (یا مثبت کاتالاز ، اما آزمایش بنزیدین منفی) یا شبه کاتالاز مثبت هستند ، به این نتیجه رسیدند که میکروارگانیسم های شناسایی شده متعلق به جنس Pediococcus ؛

باکتری های ترموفیلوس ، بدون اسپور ، گرم مثبت ، بی حرکت ، کاتالاز منفی ، کوکوهای گرما دوست ، که در محیط های مغذی با pH 9.6 و 6.5٪ NaCl رشد نمی کنند ، یافت می شوند ، سپس نتیجه می گیرند که میکروارگانیسم های شناسایی شده متعلق به گونه Streptococcus thermophilus.

5.1.3 اگر هنگام تأیید مستعمرات مشخصه در 80 cases موارد ، یعنی حداقل در 4 از 5 مستعمره ، رشد گروه ها یا نسلهای خاصی از میکروارگانیسم ها تأیید شود ، در نظر گرفته می شود که همه مستعمرات مشخصه رشد شده در یک صفحه متعلق به این گروه ، جنس یا گونه. در موارد دیگر ، تعداد میکروارگانیسم ها بر اساس درصد کلنی های تأیید شده به تعداد کل مستعمرات مشخصه ای که برای تأیید گرفته شده اند ، تعیین می شود.

5.1.5 محتمل ترین تعداد (NHF) میکروارگانیسم ها براساس تعداد لوله های مثبت مطابق با GOST 30425 تعیین می شود.

اگر رقتهای ده برابر انتخاب شده برای کاشت بیشتر بود ، به عنوان مثال ، 10 ، 10 و 10 ، مقدار جدول NHF در تفاوت بین رقتهای ده برابر انتخاب شده و جدولی ، یعنی 100 ضرب می شود.

اگر رقتهای ده برابر انتخاب شده برای کاشت کمتر بود ، به عنوان مثال 10 (1 گرم) ، 10 ، 10 ، سپس مقدار جدول NSP بر تفاوت بین رقتهای ده برابر انتخاب شده و جدولی تقسیم می شود ، یعنی به 10.

5.1.6 نتایج تعیین تعداد میکروارگانیسم ها با تلقیح در ظروف پتری یا با روش NHF یا استفاده از روش فیلتراسیون غشایی در هر 1 گرم یا 1 سانتیمتر محصول محاسبه شده و مطابق با الزامات GOST 26670 ثبت می شود.

5.2 پردازش نتایج تجزیه و تحلیل فرآورده های شیر تخمیر شده ، کشت های اولیه ، کنسانتره های باکتریایی و آماده سازی های باکتریایی باکتری های اسید لاکتیک

5.2.1 با توسعه باکتری های اسید لاکتیک در یک محیط مایع - شیر - کشک شیر.

برای محاسبه تعداد کل باکتری های اسید لاکتیک (استرپتوکوک ها و باسیل ها) ، به سه رقیق کننده آخر که شیر در آن خمیر شده است توجه کنید.

یک ویژگی عددی ایجاد کنید. این شامل سه رقم است که سه رقیق سازی اخیر را نشان می دهد. اولین رقم مشخصه عددی مربوط به رقیق شدن شیر است که در دو لوله آزمایش جمع شده است. اعداد زیر نشان دهنده تعداد لوله های شیر خمیری در دو رقیق بعدی است.

با توجه به ویژگی عددی مطابق جدول 2 ، محتمل ترین تعداد میکروارگانیسم های اسید لاکتیک یافت می شود که با رقیق سازی که اولین رقم مشخصه عددی از آن شروع می شود ضرب می شود.

جدول 2


ویژگی عددی	بیشترین تعداد میکروارگانیسم ها در اثر عفونت دو لوله موازی

ترکیبات نامناسب در جدول گنجانده نشده است.

تعداد بدست آمده مربوط به تعداد سلولهای باکتری اسید لاکتیک در 1 گرم یا 1 سانتی متر از محصول است.

نمونه ای از محاسبه احتمالی تعداد میکروارگانیسم ها در صورت عفونت دو لوله موازی در پیوست 3 آورده شده است.

اگر لازم است تعداد استرپتوکوک ها و باسیل ها را متمایز کرد ، یک آماده سازی میکروسکوپی مطابق با GOST 9225 از لوله های آزمایش که شیر در آن سفت می شود ، تهیه می شود ، آنها مورد بررسی قرار می گیرند و لوله های آزمایشی که در آنها باسیل و استرپتوکوک وجود دارد جداگانه مشخص شده است.

شمارش تعداد استرپتوکوک ها یا چوب های اسید لاکتیک همانطور که در بالا نشان داده شده است انجام می شود.

5.2.2 شمارش تعداد مستعمرات رشد یافته باکتری های اسید لاکتیک در محیط آگار و محاسبه مجدد محتوای آنها در 1 گرم یا 1 سانتی متر از محصول مطابق با GOST 9225 انجام می شود.

پیوست 1 (مرجع). ویژگی های میکروارگانیسم ها

پیوست 1
ارجاع


نام میکروارگانیسم ها	مشخصه
میکروارگانیسم های اسید لاکتیک (به استثنای جنس Sporolactobacillus که مطابق با GOST 30425 مشخص شده است)	میله های بدون اسپور ، گرم مثبت ، بی حرکت ، کاتالاز منفی یا بدون اسپور ، گرم مثبت ، بی حرکت ، کاتالاز منفی یا شبه کاتالاز تشکیل دهنده کوکوس
باکتری های جنس لاکتوباسیلوس	میله های گرم مثبت ، بدون اسپور ، کوتاه یا بلند ، بی حرکت ، کاتالاز منفی
باکتری های لجن ساز از جنس Leuconostoc	شکل گرم مثبت ، بدون اسپور ، کروی یا بیضی شکل ، به صورت زوج یا زنجیره ای قرار گرفته است ، توسط کپسولی احاطه شده است که بر اساس گرم ، کوکوس های بی حرکت کاتالاز منفی
استرپتوکوکهای گروه N از جنس استرپتوکوکوس	گرم مثبت ، بدون اسپور ، واقع در شکل زنجیره های کوتاه و بلند ، بی حرکت ، منفی کاتالاز ، در محیط های مغذی با pH 9.6 و 6.5٪ کوکوس NaCl رشد نمی کند
باکتری های جنس Pediococcus	کوکهای گرم مثبت ، بدون اسپور ، مرتب در جفت و تتراد ، کوکوس بی حرکت ، منفی کاتالاز یا شبه کاتالاز
استرپتوکوک S. ترموفیلوس	گرم مثبت ، به صورت زوج یا به شکل زنجیرهای کوتاه یا بلند ، بی حرکت ، منفی کاتالاز ، گرم دوست ، در محیط های مغذی با pH 9.6 و 6.5٪ کوکوس NaCl رشد نمی کند

پیوست 2 (مرجع). ویژگی های مستعمرات میکروارگانیسم های لاکتیک در مورد AGARIZED و ویژگی رشد در رسانه های مایع

پیوست 2
ارجاع


میکروارگانیسم ها	محیط تغذیه ای	ویژگی مستعمرات یا ماهیت رشد در محیط مایع
میکروارگانیسم های اسید لاکتیک	مایع Blikfeldt	تغییر رنگ محیط از بنفش به زرد ، کدر بودن محیط یا تشکیل رسوب ، تکامل گاز امکان پذیر است
	Blikfeldt agar ، محیط آب گوجه فرنگی	مستعمرات کوچک ، صاف یا خشن هستند
	کلم آگار	مستعمرات توسط یک منطقه شفاف احاطه شده است
باکتری های اسید لاکتیک از جنس لاکتوباسیلوس یا میکروارگانیسم های اسید لاکتیک	روگوسا و MRS آگار شدند	مستعمرات بی رنگ با قطر 1 تا 3 میلی متر ، عدسی یا ستاره شکل هستند
	مایع Cattail و MRS	تار شدن محیط
باکتری های اسید لاکتیک از جنس Leuconostoc	آگار مغذی با ساکارز	مستعمرات محدب ، گرد ، لغزنده هستند. هنگام برداشتن مستعمرات با یک سوزن یا حلقه باکتریولوژیکی ، الیاف مخاط تشخیص داده می شود
باکتری های اسید لاکتیک از جنس استرپتوکوک گروه N		S.lactis مستعمرات سفید ، کوچک و گرد تشکیل می دهد ، ممکن است مناطق روشنایی در اطراف مستعمرات وجود داشته باشد
		مستعمرات S. cremoris کوچک ، زرد ، بیضوی هستند
باکتری های اسید لاکتیک از جنس Pediococcus	چهارشنبه بریگز در اصلاح شارپ	مستعمرات کوچک ، صاف یا خشن هستند
استرپتوکوک اسید لاکتیک گونه S. thermophilus		مستعمرات زرد ، گرد یا بیضوی هستند که در اطراف آن مناطق پاکسازی مشاهده می شود

پیوست 3 (مرجع). مثال محاسبه بیشترین تعداد باکتری های لاکتیک با روش کاهش محدود

ضمیمه 3
ارجاع


مثال 1
رقیق سازی انجام شده است
تعداد لوله های تلقیح شده
لوله های آزمایش شیر گرفته

یک ویژگی عددی ایجاد کنید. این شامل سه رقم است که تعداد لوله های شیر بدون چربی را در سه رقت اخیر نشان می دهد. رقم اول (در سمت چپ) از ویژگی عددی 2 است (2 لوله رقیق سازی 1: 100 کاهش می یابد) ، دومی 1 و سومی 1 است.

در نتیجه ، ویژگی عددی 211 خواهد بود. مطابق جدول 2 با عدد 13.0 مطابقت دارد. این عدد باید در رقیق سازی که اولین رقم مشخصه عددی از آن شروع شده است ضرب شود (در مثال ، این رقت 1: 100 است).

بنابراین ، 1 سانتی متر حاوی 1300 باکتری اسید لاکتیک (13.0x100 = 1300) است.


مثال 2
رقیق سازی انجام شده است
تعداد لوله های تلقیح شده
لوله های آزمایش شیر گرفته
استرپتوکوک ها در آماده سازی های میکروسکوپی رقیق کننده های زیر یافت می شوند
میله های اسید لاکتیک در آماده سازی های میکروسکوپی رقیق کننده های زیر یافت می شوند
ویژگی عددی برای: استرپتوکوک ها برابر است

تعداد احتمالی میکروب ها برای استرپتوکوک ها برابر است

با ضرب در رقت ، تعداد استرپتوکوک ها را در 1 سانتی متر - 7000 ، میله - 250 دریافت می کنیم.

متن الکترونیکی سند
تهیه شده توسط JSC "Kodeks" و تأیید شده توسط:
انتشار رسمی
محصولات غذایی ، غذاهای کنسرو شده.
روشهای تجزیه و تحلیل میکروبیولوژیکی:
شنبه GOST ها - M: Standartinform ، 2010