صفحه 1
صفحه 2
صفحه 3
صفحه 4
صفحه 5
صفحه 6
ص 7
ص 8
صفحه 9
ص 10
ص 11
ص 12
ص 13
ص 14
استاندارد بین المللی
روش های تعیین میکروارگانیسم های اسید لاکتیک
نسخه رسمی
Standardinform
گروه H09
UDC 663 / .665.3.001.4: 006.354
استاندارد
محصولات غذایی روشها برای تعیین میکروارگانیسم های اسید لاکتیک
محصولات غذایی روشهای تعیین باکتریهای اسید لاکتیک
ISS 07.100.30 OKSTU 9109
تاریخ معرفی 01.01.91
این استاندارد در مورد محصولات طاقچه و شیر ترش ، کشتهای استارت ، کنسانتره باکتریها و آماده سازی باکتریایی باکتریهای اسید لاکتیک کاربرد دارد و روشی را برای تعیین میکروارگانیسمهای اسید لاکتیک زنده و به احتمال زیاد خالص آنها (VLF) تعیین می کند. و همچنین روش هایی برای تعیین باکتری های جنس Lactobacillus ، Leuconostoc در محصولات طاقچه (به جز محصولات کیست شیر \u200b\u200b، فرهنگ استارت ، کنسانتره باکتری و آماده سازی باکتریایی باکتری های اسید لاکتیک). گروه استرپتوکوک N ، نقش استرپتوکوک. پدیوکوک S. thermophilus و تعیین احتمالاً باکتری خالص (VLF) خالص نقش لاکتوباسیلوس.
Metol بر اساس بذر مقدار معینی از محصول و (یا) رقیق شدن آن در مواد مغذی انتخابی مایع یا آگارزه شده ، کشت محصولات زراعی در شرایط بهینه و. در صورت لزوم ، تعیین خصوصیات مورفولوژیکی و بیوشیمیایی میکروارگانیسم های شناسایی شده و محاسبه آنها.
این روش برای:
ایجاد انطباق شاخص های کیفیت میکروبیولوژیکی مواد غذایی و محصولات کیستیک ، کشتهای استارت ، کنسانتره باکتریها و آماده سازی باکتریایی باکتریهای اسید لاکتیک با الزامات مستندات هنجاری و فنی.
ایجاد استریل صنعتی مواد غذایی کنسرو:
پیدا کردن دلایل نقایص مواد غذایی.
1. انتخاب و آماده سازی نمونه ها
1.1. نمونه برداری و تهیه نمونه های مواد غذایی به جز لبنیات ، مطابق با GOST 26668. 26669
نمونه برداری از فرآورده های شیر تخمیر شده (خشک و مایع) ، کشت استارت ، کنسانتره باکتری و آماده سازی باکتریایی باکتری های اسید لاکتیک و آماده سازی آنها برای تجزیه و تحلیل - مطابق با GOST 9225 1 2.
1.2 مواد غذایی کنسرو شده برای نشت - براساس GOST 8756.18 - بررسی می شود.
مواد غذایی کنسرو شده کامل ، از نظر ظاهری طبیعی ، قبل از آزمایش در دمای 30-37 درجه سانتیگراد در ظروف با ظرفیت حداکثر 1 dm 3 شامل حداقل به مدت 5 روز مورد آزمایش قرار می گیرد.در تجاوز جنسی با ظرفیت بیش از 1 dm 3 - حداقل 7 قند.
محصولات غذایی که در آن تعداد میکروارگانیسم های اسید لاکتیک عادی شده است ، تحت کنترل دما نیستند.
رقیق محصولات براساس محلول پپتون نمکی طبق GOST 26669 تهیه می شود.
رقت های اولیه محصولات با کسری انبوه NaCI بیش از 5٪ با استفاده از آب پپتون تهیه می شوند. رقت های اولیه ماهی و فرآورده های گوشتی با استفاده از نمکی فیزیولوژیکی تهیه می شود.
GOST R 53430 - 2009.
2. برنامه ها ، مواد و مجلات
برای آزمایش تجهیزات ، مواد ، مواد معرف اما GOST 10444.1 استفاده کنید. GOST 9225 و موارد زیر:
مقیاسهای آزمایشگاهی با هدف کلی با خصوصیات اندازه گیری مطابق با GOST 24104 3. با بیشترین حد وزن تا 200 گرم و خطای 2 میلی گرم error (برای معرفهای توزین):
مقیاسهای آزمایشگاهی با هدف کلی با خصوصیات اندازه گیری اما GOST 24104 3. با بیشترین حد وزن تا 200 گرم و حاشیه خطای 15 میلی گرم ((برای توزین محصول)؛
میکروسکوپ نوری بیولوژیکی با دستگاهی برای میکروسکوپ کنتراست فاز یا سایر مارک های مشابه: عینک را مطابق با GOST 6672 قرار دهید. عینک موضوع مطابق با GOST 9284:
یک ترموستات با طیف وسیعی از دمای کار از 35 تا 28 درجه سانتیگراد که اجازه می دهد دمای معینی با دقت 1 ± 1 درجه سانتیگراد حفظ شود. شاخه های چوب پنبه اما GOST 5541؛
ذره بین تاشو جیب ، افزایش 4-10 بار مطابق با GOST 25706؛ طول پانکراتین از آماده سازی غلاف باکتریایی و ویروسی: کلروفرم فنی مطابق با GOST 20015؛
شیر بدون چربی با اسیدیته بیشتر از 19 "T. بدست آمده از شیر گاو حداقل با درجه 2 مطابق با GOST 13264 4 یا پودر شیر خامه گرفته مطابق با GOST 10970 5 ؛ L- آرژنین هیدروکلراید ؛ اسید پایه یا هیدروکلریک ؛ اسید پتاسیم: سولفات کربوکسیل i ce؛ b half okt؛ tween-80؛ سدیم استات؛ سیترات آمونیوم؛
سولفات منیزیم (MgS0 4 7H 2 0)؛
سولفات منگنز (MnS0 4 2H 2 0)؛
سولفات منگنز (MnS0 4 4H 2 0)؛
اسید سوربیک:
نیگروسین؛
3.1 تهیه محلول های معرفها و نشانگرها برای آزمایش محصولات غذایی (بجز محصولات شیر \u200b\u200bتخمیر شده ، کشتهای استارت ، کنسانتره باکتریها و آماده سازی باکتریایی باکتریهای اسید لاکتیک)
3.1.1. نشانگر بنفش بروموکروزول ، محلول با غلظت جرم 1 گرم در روز 3: 1/0 گرم بنفش برموکروزول با رعایت قوانین آسپتیک منتقل می شود ، با آب شستشو با استریل استریل ، داخل ظرف های حجمی با ظرفیت 100 سانتی متر 3 ، حجم را با همان آب به علامت تنظیم می کند. محلول بیش از 3 ماه در دمای اتاق نگهداری نمی شود.
3.1.2. کربنات کلسیم ، سیستم تعلیق آبی با غلظت جرم 30 گرم در روزانه 3: 3 گرم کربنات کلسیم ، p راستریل ، مطابق با GOST 10444.1. با آب مقطر شستشو داده شده و در اندازه گیری ظروف با ظرفیت 100 سانتی متر 3 ، حجم آن را به علامت می رسانید. سیستم تعلیق در دمای (12111) 3 درجه سانتیگراد به مدت 20 دقیقه استریل می شود. سیستم تعلیق بیش از 3 ماه در دمای اتاق نگهداری نمی شود.
3.1.3. کربولفوکسین. محلول غلیظ: 1 گرم فوکسین با 10 cm 3 از 96٪ اتانول و 100 cm3 محلول فنل با غلظت جرم 50 گرم در روز در روز 3 مخلوط می شود.
برای تهیه محلول کاری کاربولفوکسین ، 90 سانتی متر 3 آب از آب پخش شده به محلول غلیظ کاربولفوکسین 10 اینچی اضافه می شود.
3.1.4. یک محلول بنفش ترد با غلظت جرم 10 گرم در روز 3: من گرم بنفشه کریستالی منتقل می شود ، با شستن با آب مقطر ، داخل یک ظرف اندازه گیری با ظرفیت 100 سانتی متر ، حجم آن با علامت تنظیم می شود و محلول در بیش از 3 ماه در دمای اتاق ذخیره می شود.
3.1.5. سیستم تعلیق نیگروسین با غلظت 100 گرم در دسی متر در روز ": 10 گرم نیکروسین با آب مقطر شستشو داده می شود ، در یک ظرف اندازه گیری با ظرفیت 100 سانتی متر قرار می گیرد. 3. حجم آن به علامت تنظیم می شود .در دمای آب 45-50 * C در حمام آب گرم می شود ، سپس از طریق یک پنبه گاز فیلتر می شود. فیلتر
3.1.6. محلول پپتون نمک مطابق با GOST 26669 تهیه می شود.
3.1.7. آب پپتون مطابق با GOST 26669 تهیه می شود.
3.1.8. اسید سوربیک ، محلول ابریشم: 1 اسید گسوریک منتقل می شود و با محلول سدیم پیروکسید با NaOH \u003d 1 mol / dm 3 در ظرفهای حجمی با ظرفیت 100 سانتی متر 3 شستشو می شود. حجم با همان محلول به علامت تنظیم می شود. محلول حاصل با استفاده از فیلتراسیون غشایی مطابق با GOST 26670 استریل می شود.
مجاز به تهیه محلول اسید سوربیک بدون تصفیه با رعایت قوانین آسپتیک است. که در آن محلول پیروکسید سدیم در آب مقطر استریل تهیه شده است.
3.1.9. معرف برای تعیین سیتوکروم ها: 1 گرم بنزیدین اساسی یا اسید هیدروکلریک در 20 سانتی متر 3 از اسید استیک یخبندان 99.8٪ حل می شود ، 30 سانتی متر 3 آب مقطر اضافه شده و به آرامی گرم می شود ، پس از خنک شدن ، 50 سانتی متر "96٪ اتانول" به محلول اضافه می شود. به مدت 1 ماه در یخچال نگهداری می شود.
3.1.10. محلول نمکی مطابق با GOST 10444.1 تهیه می شود.
3.2 تهیه محیط کشت برای آزمایش محصولات طاقچه (بجز محصولات شیر \u200b\u200bتخمیر شده ، کشتهای استارت ، کنسانتره باکتریها و آماده سازی باکتریایی باکتریهای اسید لاکتیک)
3.2.1. محیط متراکم بلکفلت مطابق با GOST 10444.1 تهیه شده است.
3.2.2. مایع Blikfella متوسط \u200b\u200b»: در 950 سانتی متر 3 یک ورقه آب شیرین شده 10 گرم لاکتوز حل می شود. 10 گرم گلوکز ، 5 گرم پپتون ، از طریق فیلتر کاغذی جوشانده و فیلتر می شوند. 20 سانتی متر مربع عصاره مخمر به صافی اضافه شد. محلول 32 سانتی متر 3 برمید کروز نوجوان بنفش مطابق با 3.1.1. pi 1/17 pi 17.3 تنظیم کنید. درون لوله های استریل ریخته و در دمای 1 11 117 * C به مدت 20 دقیقه استریل می شود
3.2.3. چهارشنبه بریگز ، در اصلاحات شری:
15 گرم پپتون به 875 cm 3 آب مقطر اضافه می شود. 20 گرم گلوکز. 25 سانتی متر 3 عصاره مخمر ، 5 گرم استات سدیم. 5 گرم فسفات پتاسیم به صورت یکتایی جایگزین می شود. 2 گرم اسید سیتریک آمونیوم. 100 سانتی متر 3 آب گوجه فرنگی (بر اساس این واقعیت است که آب حاوی حداقل 4.5٪ مواد جامد محلول ، اگر آب گوجه فرنگی حاوی مقدار مختلفی از مواد جامد باشد ، محاسبه محتویات جامدات 4.5٪ است). 1 cm 3 راز - 80. 5 cm 3 محلول نمکی (MgS0 4 7H ؛ 0-11.5 گرم. MnS0 4 4H 2 0 - 2.86 گرم ، FeS0 4 7H 2 0 - 0.68 گرم. آب مقطر تا 100 سانتی متر 3) ، 15 گرم آگار
این مخلوط را روی حرارت کم جوشانده تا وقتی که آگار کاملاً حل شود. pH را طوری تنظیم کنید که پس از عقیم سازی در دمای 25 * C (6.510.1) باشد. محیط در دمای 1 درجه (1 115 115) * C به مدت 15 دقیقه استریل می شود.
3.2.4 محیط مخمر: در 100 سانتی متر مربع عصاره مخمر تهیه شده مطابق با GOST 10444.1. 900 سانتی متر 3 آب مقطر اضافه کنید. 10 گرم استرلیزه اما GOST 10444.1 کربنات کلسیم و 100 گرم ساکارز. این مخلوط برای حل ساکارز گرم می شود ، pH از این طریق تنظیم می شود. به طوری که پس از استریلیزاسیون در دمای 25 درجه سانتیگراد (1 7 1/7)) قرار می گیرد. در لوله های 10 سانتی متر 3 ریخته می شود و در دمای استریل می شود< 121 ± 1) ‘С в течение 15 мин.
3.2.5. محتوی کلم آگار تهیه شده اما GOST 10444.1.
3.2.6. محیط MPC مایع است: 10 گرم پپتون در یک فلاسک حجمی با ظرفیت 1.0 dm 3 قرار می گیرد. عصاره مخمر 20 سانتی متر 3. 20.0 گرم گلوکز ، 1.0 سانتی متر 3 فاصله - 80 ، 2.0 گرم فسفات پتاسیم رد شده است. 5.0 گرم استات سدیم ، 2.0 گرم سیترات تریامونیوم ، 0.2 گرم سولفات منیزیم ، 0.05 گرم سولفات منگنز (MnS0 4 4H 2 0). آب گوشت را به مارک اضافه کنید. قطعات را با گرم کردن در یک حمام آب حل کنید و pH را تنظیم کنید تا پس از عقیم سازی در دمای 25 درجه سانتیگراد (6.210.1) قرار گیرد .این محیط در 10 سانتی متر 3 در لوله های استریل ریخته می شود و در دمای (12111) درجه سانتیگراد به مدت 15 اتوکلاو می شود. دقیقه لوله های آزمایش شده با مواد مغذی در دمای (411) درجه سانتیگراد بیش از 30 قند ذخیره نمی شوند.
3.2.7 MPC متوسط \u200b\u200bو یک گارس دیگر مطابق دستورالعمل مندرج در بند 3.2.6 تهیه شده است. با اضافه کردن 15-18 حلقه پس از حل شدن اجزاء ، محیط را درون گلدانهای استریل ریخته و در اتوکلاو در دمای (12111) "C به مدت 15 دقیقه استریل می کنیم. محیط آماده شده در دمای (411) * C بیش از 30 قند ذخیره نمی شود.
در صورت لزوم ، برای افزایش انتخاب ، پس از عقیم سازی ، 1 سانتی متر 3 از محلول قلیایی اسید سوربیک اما n به 1 dm 3 از محیط آگار یا جامد اضافه می شود. 3.1.8.
3.2.8. محیط آبگوشت پپتون گوشت با pH 9.6:
آبگوشت و پنتون گوشت مطابق با GOST 10444.1 تهیه شده است. pH را با استفاده از محلول های قلیایی و اسید مطابق با GOST 10444.1 تنظیم کنید تا پس از استریلیزاسیون در دمای 25 درجه سانتیگراد 9.6 باشد .این محیط در دمای (1 12 121) * C به مدت 20 دقیقه استریل می شود.
3.2.9. آبگوشت پپتون گوشتی با میزان کلرید سدیم 6.5٪ مطابق با GOST تهیه می شود
10444.1 ، اما هنگام پخت و پز مقدار کلرید سدیم اضافه شده را به 65 گرم در هر محیط DM 3 افزایش دهید.
3.2.10 مواد مغذی آگار با ساکارز:
100.0 گرم ساکارز ، 15.0 گرم آگار به 1 میلی متر مکعب گوشت غیر نپتون 3 میلی گرم اضافه می شود و گاه به هم زده می شود. این مخلوط تا جوش و انحلال کامل همه اجزا گرم می شود.
محیط تا 45-55 درجه سانتیگراد سرد می شود و pH تنظیم می شود به طوری که پس از عقیم سازی در دمای 25 درجه سانتیگراد (0.1 7 7.1) قرار می گیرد.
محیط را درون گلدان ها ریخته و به مدت 15 دقیقه با دمای (1 12 121) * C استریل می شود. پس از استریلیزاسیون و بررسی pH ، محیط به خوبی مخلوط می شود و داخل ظروف پتری ریخته می شود و در دمای (1 4 4) * С ذخیره می شود نه بیشتر از 14 قند.
3.2.11 محیط ردی: پایه متوسط \u200b\u200b- 15.0 گرم آگار به یک گلدان حاوی 500 سانتی متر مربع گاو مقطر اضافه می شود و تا زمانی که آگار حل شود در یک حمام آب گرم می شود. در یک فلاسک دیگر حاوی 500 سانتی متر مربع آب مقطر ، 10.0 گرم سیترات پتاسیم و 15.0 گرم کربوکسیل متیل سدنلوز اضافه شده و با گرم شدن حل می شود. محتویات هر دو فلاسک مخلوط و 3.0 گرم پپتون ، 25 سانتی متر مربع عصاره مخمر اضافه شد. 1.25 گرم پتاسیم (1 عدد)<1юрнокнслого двузамешенною. 5.0 г L-аргинин гидрохлорида. нагревают на водяной бане до полного растворения компонентов, охлаждают до температуры 45-55 "С и устанавливают pH таким образом, чтобы после стерилизации он составлял при 25 "С (6.310.2). Основу среды стерилизуют при температуре < 121 ± 1) "С в течение 15 мин и хранят при температуре (4±1) *С не более 30 суг.
برای تهیه یک ماده غذایی مغذی ، 5.0 سانتی متر 3 از شیر استریل استریل به 1 میلی متر 3 متر مذاب اضافه می شود و به 45-55 "از پایه خنک می شود. از پایه 100 سانتی متر 3 تعلیق کربنات کلسیم با غلظت جرم 30 گرم در روز و 3 سانتی متر از محلول کروسولون برمید در غلظت جرم بنفش من g / dm 3.
3.2.12 محیط روگوز مایع است: 10.0 گرم پپتون با یک فلاسک حجمی با ظرفیت 1.0 dm 3 تداخل می کند.
25.0 سانتی متر 3 عصاره مخمر. 20.0 گرم گلوکز. راز 1.0 سانتی متر 3 - 80. 6.0 گرم فسفات پتاسیم به صورت منزوی ، 2.0 گرم سیترات آمونیوم ، 25.0 گرم استات سدیم. 1.32 سانتی متر 3 اسید استیک یخبندان ، 0.575 گرم سولفات منیزیم. 0.12 گرم سولفات منگنز (MnS0 4 2 GPO) ، 0.034 گرم سولفات آهن ، آب مقطر را به آن اضافه می کنیم ، اجزاء را با گرم کردن در یک حمام آب حل می کنیم و pH را تنظیم می کنیم تا پس از عقیم سازی 25 درجه سانتیگراد شود (5.410.1) در محیط ریخته می شود. 10 سانتی متر 3 در لوله های استریل و در یک اتوکلاو در دمای (12111) * C به مدت 15 دقیقه لوله ها با یک ماده مغذی ذخیره شده در دمای (411) * C و بیشتر از 30 قند استریل نمی شوند.
3.2.13. محیط روگوز مطابق دستور العمل توصیف شده در و. 3.2.12 با علاوه بر این
20.0 گرم آگار. پس از حل شدن اجزاء ، محيط در گلدان هاي استريل قرار داده و در اتوکلاو در دماي (12111) C به مدت 15 دقيقه استريل مي شود. محیط نهایی در دمای (411) درجه سانتیگراد بیش از 30 قند ذخیره می شود.
3.2.14. محیط حاصل از آب گوجه فرنگی تهیه شده است اما GOST 10444.1.
3.2.15. متوسط \u200b\u200bبرای تعیین pseudocatalase: در یک فلاسک حجمی با ظرفیت 1 dm 3
5.0 پپتون. عصاره مخمر 25 سانتی متر 3. 0.5 سانتی متر 3 از فاصله - 80. 0.1 گرم (MnS0 4 4H\u003e 0). 0.5 گرم گلوکز. 15 حلقه با گوشت و آبگوشت پر شده تا علامت گذاری شود ، اجزاء را با گرم کردن در حمام آب حل کنید و pH را تنظیم کنید تا پس از عقیم سازی در دمای 25 درجه سانتیگراد باشد (6.910.1). این مواد را در لوله های آزمایش 5-7 سانتی متر 3 ریخته و در اتوکلاو در دمای (12111) * C به مدت 15 دقیقه استریل می کنند. پس از عقیم سازی ، لوله ها روی سطح متمایل قرار می گیرند تا از جمب ها بدست آیند.
3.2.16. چهارشنبه لی:
اساس ماده متوسط \u200b\u200b- 10.0 گرم پپتون با یک فلاسک حجمی با ظرفیت I dm 3 تداخل خواهد کرد. عصاره مخمر 50 سانتی متر 3. 5.0 گرم لاکتوز ، 3.0 گرم کربنات کلسیم مطابق با GOST 10444.1 ، 0.5 گرم از Na 2 HP () 4 استریل شده است. 18 گرم آگار ، آب مقطر را به علامت اضافه كنید ، اجزاء را با گرم كردن در حمام آب حل كنید و pH را تنظیم كنید تا پس از استریلیزاسیون آن 25 درجه سانتیگراد (7.011) باشد .این ماده در اتوكلاو در دمای (12111) * C به مدت 20 دقیقه استریل می شود. و در صورت لزوم ، در دمای 411 درجه سانتیگراد بیش از 30 روز ذخیره شود.
برای تهیه محیط مواد مغذی ، 20 سانتی متر 3 از محلول استریل برم کرسول بنفش با غلظت جرم 1 گرم در روز / DM 3 به 1 dm 3 پایه اضافه می شود ، مخلوط شده و داخل ظرف های پتری ریخته می شود. محیط در دمای (1 4 4) * C بیش از 7 قند ذخیره می شود.
3.3 تهیه محیط کشت برای آزمایش محصولات کیستیک ، کشتهای استارت ، کنسانتره باکتریها و آماده سازی باکتریایی باکتریهای اسید لاکتیک
3.3.1. ساخت شیر \u200b\u200bفلج
شیر بدون چربی طبیعی یا بازسازی شده به مدت 20 دقیقه با آب بخار مایع درمان می شود و یخچال می زند! به درجه حرارت (2 45 45 ")" C. اسیدیته فعال در pH تنظیم می شود (1/7 7. 7/7). محلول آبی با کسر جرم NaOH 40٪ اضافه می شود. به 1000 سانتی متر "شیر ، 0.5 تا 1.0 گرم پودر پانکراسین اضافه می شود. سپس 5 تا 6 سانتی متر 3 کلروفورم به شیر اضافه می شود.فلاسک با یک درپوش چوب پنبه بسته می شود و در دمای (4012) * C به مدت 18-24 ساعت نگه داشته می شود در طی 3-5 ساعت اول شیر 2-3 بار ورز می خورد (دریچه کمی باز می شود برای حذف کلروفرم).
سپس شیر هیدرولیز شده از طریق فیلتر کاغذی فیلتر می شود و با آب مقطر به نسبت 1: 1 رقیق می شود. میزان اسیدیته فعال را روی pH تنظیم کنید (7،110.1). محلول آبی را با کسری انبوه NaOH 40٪ اضافه کرده و برای تهیه آگار با شیر هیدرولیز شده استفاده می شود. در مورد ذخیره سازی ، هیدرولیز شده در اتوکلاو در دمای 1 12 121 * С به مدت 15 دقیقه کمی استریل می شود.
3.3.2. تهیه آگار رحم هیدرولیز شده
شیر هیدرولیز ، cm3 - 1000:
آگار ، گرم - 15.
15 حلقه به 1000 سانتی متر 3 گرم از رحم فلج اضافه می شود. این محفظه تا زمانی که آگار کاملاً ذوب شده و از طریق پشم پنبه فیلتر شود ، گرم می شود و درون لوله های آزمایش یا فلاسک ها ریخته می شود و در اتوکلاو در دمای (12111) * С به مدت (1011) دقیقه استریل می شود.
3.3.3. آماده سازی رحم پوست کنده شده استریل
ویسکوزیته کم چربی طبیعی یا بازسازی شده 10 سانتی متر 3 در لوله های آزمایش حل شده و در دمای (12111) ‘С به مدت (1011) دقیقه استریل می شود.
4. تست
4.1 آزمایش مواد غذایی (به استثنای فرآورده های شیر تخمیر شده ، کشت های استارت ، کنسانتره باکتری ها و آماده سازی باکتریایی باکتری های اسید لاکتیک)
4.1.1. برای تعیین میکروارگانیسم ها از نمونه پف کرده شده محصول یا رقیق شدن اولیه آن استفاده می شود.
برای تعیین حضور و شمارش تعداد میکروارگانیسم های موجود در ظروف پتری ، تعدادی رقت از نمونه یک محصول طاقچه یا از یک رقت اولیه مطابق با تعداد مجاز میکروارگانیسم های ذکر شده در مستندات نظارتی و فنی برای نوع خاصی از محصول طاقچه تهیه شده است.
برای محاسبه LDP از یک نمونه از یک محصول طاقچه ، یک اولیه و یک سری از رقت ده برابر تهیه شده است به طوری که میکروارگانیسم ها در محصولات بالاترین رقت تشخیص داده نمی شوند. د | من کاشت حداقل سه رقیق متوالی را انتخاب می کنم. از هر رقیق سه لوله موازی بذر می شود.
4.1.2. D1Ya که به روش UHF و در ظروف پتری در محیط مایع کاشته می شود ، 1.0 سانتی متر از نمونه محصول آماده شده و (یا) رقیق سازی آن با استفاده از روش عمیق گرفته می شود ؛ برای کاشت روی ظروف پتری با روش سطح ، 1 / \u200b\u200b0- 2/2 سانتی متر 3 گرفته می شود.
محصولات زراعی با روش های عمیق یا سطح و همچنین با استفاده از فیلتراسیون غشایی ، مطابق با GOST 26670 انجام می شود.
هنگام استفاده از روش فیلترهای غشایی ، حجم یک محصول مایع را فیلتر می کنند ، که در مستندات نظارتی و فنی برای یک محصول طاقچه خاص مشخص شده است.
4.1.3. به منظور تعیین حضور یا شمارش VHF میکروارگانیسم های اسید لاکتیک ، کاشت در یکی از رسانه های مایع نشان داده شده در pi انجام می شود. 3.2.2. 3.2.6 یا 3.2.12.
اگر پس از افزودن محصول به محیط Blackfelat ، محیط تغییر رنگ دهد ، چند قطره از محلول مخاط استریل (NaOH یا KOH) با غلظت جرم 50 گرم در dm 3 اضافه می شود تا رنگ اولیه بازیابی شود.
برای تعیین وجود یا تعداد تعداد میکروارگانیسم های اسید لاکتیک ، مجاز است به جای تلقیح در یکی از رسانه های آگرای شده مشخص شده در بندهای 3.2.1 ، 3.2.5 ، 3.2.7 ، 3.2.13 یا 3.2.14 ، در محیط مایع تلقیح شود.
برای تعیین وجود یا شمارش باکتریهای LF از جنس Lactobacillus ، کاشت در یکی از رسانه های مایع مشخص شده در دوشنبه انجام می شود. 3.2.6 یا 3.2.12.
به منظور تعیین تعداد یا تعداد تعداد باکتری های جنس Lactobacillus ، بجای بذر در رسانه های مایع ، کاشت با روش عمیق در یکی از گاز سایر رسانه ها که در هیچکدام مشخص نشده است انجام می شود. 3.2.7 یا 3.2.13.
برای تعیین وجود باکتری های جنس Leuconostoc ، کاشت در محیط مایع نشان داده شده در و انجام می شود. 3.2.4
برای تعیین حضور به جای استفاده از یک مایع مایع و همچنین برای شمارش تعداد باکتری های جنس Leuconostoc در ظروف پتری یا با استفاده از روش فیلتراسیون غشایی ، سطح روی یک محیط آگار بذر گذاشته می شود که در آن نشان داده شده است و. 3.2.10
به منظور تعیین تعداد یا تعداد تعداد استرپتوکوکهای استرپتوکوکی فوپا از جنس Streptococcus ، تلقیح با روش عمیق در یک محیط آگار مشخص شده در بند 3.2.11 انجام می شود. و برای S.thermophilus از محیط مطابق با و استفاده کنید. 3.2.16.
برای تعیین تعداد یا تعداد تعداد باکتری های جنس Pediococcus ، تلقیح شده در محیط آگار مشخص شده در بند 3.2.3 انجام می شود.
4.1.4. محصولات زراعی برای تعیین حضور یا تعداد تعداد میکروارگانیسم های اسید لاکتیک. باکتری های جنس Lactobacillus streptococci از گروه N جنس استرپتوکوک به مدت بیش از 5 روز در دمای (1 30 30) * C یا بیش از 3 روز در دمای (1 37 37) * C انکوبه می شوند. محصولات زراعی برای تعیین حضور یا تعداد تعداد باکتریهای جنس Leuconostoc به مدت بیش از 5 روز در دمای (1 22 22) * С انکوبه می شوند. محصولات زراعی برای تعیین حضور یا تعداد S.thermophilus (3 48 48) ساعت در دمای 1 45 45 ub انکوبه می شوند. محصولات زراعی روی ظروف پتری برای جوجه کشی در حضور یا تعداد باکتری های جنس Leuconostoc ، وارونه می شود.
جوجه کشی محصولات زراعی در رسانه مایع متوقف می شود وقتی علائم قابل مشاهده است.
شمارش مقدماتی مستعمرات در رسانه های آگار پس از 48 ساعت انجام می شود
4.1.5. در محصولات زراعی روی محوطه آگار برای تعیین میزان یا تعداد تعداد میکروارگانیسم های اسید لاکتیک ، باکتری های جنس Lactobacillus ، Pediococcus streptococcus fuppa N از جنس Streptococcus. S.thermophilus. با توجه به GOST 30425 یا یکی از روشهای زیر دسترسی به دسترسی قابل دسترسی است:
روی یک ماده مغذی جامد شده در ظروف پتری ، یک پایه دوم را مذاب ریخته و در دمای agarized (45 ± I) * سرد شده (C) به مقدار 5/0 سانتی متر 1 گرم کرده و برای سفت شدن می گذاریم:
ظروف پتری در محیط گازی متشکل از 95٪ N 2 و 5٪ CO 2 قرار می گیرد:
ظروف پتری در بی هوازی قرار می گیرد. دستگاه بسته است ، با استفاده از پمپ خلاء خلاء 86.6-93.3 kPa ایجاد می شود.
پارافین مایع استریل با یک ماده مایع به مقدار لازم برای بدست آوردن ستونی در حدود 2 سانتی متر به هر لوله اضافه می شود.
4.1.6. محصولات روزانه را روی مایعات مایع خفه کنید و لوله\u200cهایی را با علائم قابل مشاهده برای رشد بکشید. ماهیت رشد در رسانه های مایع در پیوست 2 آورده شده است. از لوله هایی که علائم رشد دارند ، روی رسانه های آگاریزون تحقیق شده است (بند 4.1.3 را ببینید) با استفاده از یک حلقه باکتریولوژیک به شرح زیر انجام می شود. رشد مستعمرات جدا شده محصولات جوجه کشی بلکه جوجه کشی می شوند. 4.1.4.
4.1.7. محصولات زراعی روی محاصره شده پس از انکوباسیون بررسی شده و ظروف پتری برای شمارش انتخاب می شوند که از این تعداد 15 تا 150 کلنی مشخصه رشد کرده اند.
هنگام تعیین تعداد میکروارگانیسم ها به روش فیلترهای غشایی ، مجاز به انتخاب تعداد ظروف پتری برای شمارش است اگر کمتر از 15 کلنی مشخصه روی فیلترها رشد کرده باشند.
خصوصیات مستعمرات مشخصه در پیوست 2 آورده شده است.
4.1.8. برای تأیید تعلق مستعمرات مشخصه به میکروارگانیسم های اسید لاکتیک یا باکتری های یکی از جنس Lactobacillus ، Leuconostoc. Pediococcus streptococcus fuppa N جنس Streptococcus. S.thermophilus ، از محصولات زراعی توسط و. 4.1.7 یا 4.1.6 حداقل 5 کلونی مشخصه. وابستگی هر کلونی منتخب به میکروارگانیسم های خاص در رابطه با لکه گرم ایجاد می شود. تحرک ، وجود کاتالاز ، علاوه بر این ، هنگام شناسایی باکتری های جنس Leuconostos ، هنگام شناسایی streitokok- وجود کپسول ها مشخص می شود.
گونه S.thermophilus و streptococci از گروه N جنس Streptococcus - وجود رشد در مایع گوشتی-پپتون با pH برابر 6.6 و در مایع پپتون گوشتی با 6.5٪ NaCI.
4.1.8.1. برای تعیین نسبت میکروارگانیسم ها به لکه های گرم ، از کلنی ها اسمیر تهیه می شود که مطابق با GOST 30425 و میکروسکوپی رنگ آمیزی می شوند.
4.1.8.2. برای مطالعه تحرک میکروارگانیسم ها از مستعمرات ، آماده سازی با روش قطره آویزان یا خرد شده و میکروسکوپی تهیه می شود. نتایج میکروسکوپی مطابق با پیوست I ارزیابی می شود.
4.1.8.3. فعالیت کاتالاز فرهنگها مطابق با GOST 30425 تعیین می شود.
نتایج تعیین فعالیت کاتالاز مطابق با پیوست 1 ارزیابی می شود.
کاهش پراکسید هیدروژن در جنس باکتری ها ؛! پدیوکوک به دلیل آنزیم pseudocatalase ممکن است. بنابراین ، هنگام تعیین میکروارگانیسم های لاکتیک یا باکتری های جنس Pediococcus اگر میکروارگانیسم های گرم مثبت ، میکروارگانیسم های بی حرکت در کلنی های مشخصه یافت می شوند. با داشتن یک واکنش مثبت کاتالاز ، عدم وجود سیتوکروم ها را با تنظیم آزمایش بنزیدین کنترل کنید. به همین دلیل ، کلونی های باکتریایی 24-48 ساعت-IX) که روی ظروف پتری رشد می کنند با محلول بنزیدین ریخته می شوند. مشخص شده در بند 3.1.9. پس از اشباع محلول با کلنی ها ، تقریباً همان حجم 5٪ پراکسید هیدروژن به فنجان اضافه می شود. میکروارگانیسم های اسید لاکتیک ، از جمله باکتری های جنس Pediococcus ، فاقد سیتوکروم هستند. در حضور سیتوکرومها ، مستعمرات به رنگ آبی مایل به سبز یا آبی روشن دیده می شوند.
در صورت عدم وجود بنزیدین ، \u200b\u200bتعیین حضور گالاز غیر دوپره در محیط بند 3.2.15 با غلظت گلوکز پایین 0.05٪ مجاز است.
محصولات زراعی طبق بند 4.1.4 جوجه کشی می شوند. تعیین ایزووودوکاتاز و همچنین کاتالاز طبق GOST 30425 انجام می شود.
فرهنگهای تشکیل دهنده pseudocatalase به جنس Pediococcus تعلق دارند.
4.1.8.4. هنگام شناسایی باکتری های جنس Leuconostoc ، آماده سازی ها برای شناسایی کپسول های باکتریایی با Buri تهیه و آغشته می شوند. برای انجام این کار ، بر روی یک اسلاید شیشه ای به خوبی چرب و خزدار ، قطره یک فرهنگ باکتریایی با یک پودر ریز از لاشه سیاه یا تعلیق نیگروسین مخلوط می شود.
با استفاده از یک لیوان دیگر با لبه های صیقلی ، یک اسمیر نازک به سرعت تهیه می شود که با عبور چندین بار آن از طریق شعله مشعل برطرف می شود. اسمیر با محلول بنفشه کریستالی یا محلول کاربولکسین رنگ آمیزی می شود. به آرامی در یک ظرف با آب شسته شده ، در هوا بگذارید تا خشک شود و میکروسکوپ شود. مجاز به خشک کردن یک لکه بین ورق های کاغذ فیلتر نیست. پس زمینه دارو با تعلیق نازک ریمل سیاه یا تیروزین رنگ آمیزی می شود. بدن باکتری ها به صورت تک رنگ رنگ آمیزی می شوند. کپسولها بدون رنگ باقی می مانند.
4.1.8.5. هنگام شناسایی گروه N استرپتوکوکی N؛ استرپتوکوک ، استرپتوکوک از گونه S. thennophilus ، عدم رشد روی گوشت و مایع پپتون با pH 9/6 و آبگوشت گوشت پیتون با محتوای کلرید سدیم 6.5 درصد را تعیین می کنند.
برای این فرهنگ ، ن. 4.1.8 در رسانه های مشخص شده در دوشنبه در فرهنگ محلی سازی شد. 3.2.8 و 3.2.9.
محصولات زراعی در دمای (1 30 30) درجه سانتیگراد برای 3 قند انکوبه می شوند. و هنگامی که S. thennophilus مشخص شود ، محصولات زراعی در دمای (1 45 45 درجه سانتیگراد) به مدت 3 روز انکوبه می شوند.
4.2. آزمایش فرآورده های شیر تخمیر شده ، کشت های اولیه ، کنسانتره باکتری ها و آماده سازی باکتریایی باکتری های اسید لاکتیک
4.2.1. تهیه رقیق سازی محصولات چربی اسیدی (خشک و مایع) مطابق با GOST 9225.
برای تهیه رقیق شدن کشتهای استارت ، کنسانتره باکتریها و آماده سازی باکتریها باید تمام وقت باشند! باکتری ها ، لبه های بطری و بسته بندی با الکل پاک می شوند ، لبه بطری سوزانده می شود و چوب پنبه برداشته می شود ، لبه بسته بسته شده با چکش های پروفیل بریده می شود ، وزن من از گرم مواد تست شده در ملات استریل یا پروفیل شده ، با پوشانده شده از یک ظرف پتری یا کاغذ استریل ، کاملاً مالیده می شود و به مقدار کمی محلول کلرید اضافه می شود سدیم یا فسفات بافر از یک فلاسک حاوی محلول 99 سانتی متر "! یا بافر. مواد معلق با محلول باقی مانده کلرید سدیم یا بافر فسفات در داخل فلاسک ریخته می شود. و یک رقیق دوم از I: 100 بدست آورید.
و رقیق دوم فرآورده های شیر تخمیر شده ، کشتهای استارت ، کنسانتره باکتریها و آماده سازی باکتریایی باکتریهای اسید لاکتیک با رعایت میزان باکتریهای اسید لاکتیک مشخص شده در مستندات هنجاری و فنی توسط رقتهای زیر تهیه می شوند. من
4.2.2 کاشت برای شمارش تعداد استرپتوکوک های لاکتی در محیط مواد مغذی توصیه شده یا مایع انجام می شود که مطابق با آنها تهیه نشده است. 3.3.2 و 3.3.3. و کاشت برای محاسبه مقدار لجن اسید لاکتیک - در یک محیط مایع تهیه شده طبق بند 3.3.3.
برای تلقیح در محیط کشت آگار ، رقت TC انتخاب می شود ، هنگام کاشت که 15 تا 150 کلنی بر روی صفحات رشد می کنند.
از هر نمونه ، تلقیح با توجه به GOST 9225 1 سانتی متر 3 از رقیق کننده های مناسب محصول (به جدول 1 مراجعه کنید) روی ظروف پتری.
وقتی از سه یا چهار رقت آخر به یک ماده غذایی مایع مایع تلقیح می شود (به جدول 1 مراجعه کنید) ، سانتی متر از هر رقت به دو لوله موازی با شیر کم چربی استریل وارد می شود.
4.2.3 ظروف آزمایشگاهی یا ظروف پتری با تلقیح در یک ترموستات قرار داده شده و در دمای (1 30 30) * С برای شمارش باکتریهای اسید لاکتیکی مزوفیلیک اسید ، در دمای 1 40 40 * * С برای شمارش باکتریهای اسید لاکتیک ترموفیلیک و در (1 32 32) * انکوبه می شوند. شمارش مشترک باکتریهای اسید لاکتیک مزوفیلیک و ترموفیلیک اسید. محصولات زراعی برای 72 ساعت انکوبه شدند
5.1. پردازش نتایج آنالیز مواد غذایی (به جز محصولات لبنی ، کشت استارت ، کنسانتره باکتری ، آماده سازی باکتریایی باکتریهای اسید لاکتیک)
5.1.1. نتایج تجزیه و تحلیل محصول غذایی برای هر نمونه به طور جداگانه ارزیابی می شود.
5.1.2. در صورت بررسی خصوصیات فرهنگی ، مورفولوژیکی و بیوشیمیایی در تعیین:
میکروارگانیسم های گرم لاکتی گرم مثبت یافتند. باسیلهای متحرک ، کاتالاز منفی یا غیر مطابق. گراموز بی تحرک ، کاتالاز منفی یا تشکیل شبه کاگال آزو کوکی ، نتیجه گیری در مورد آن است. میکروارگانیسم های شناسایی شده اسید لاکتیک هستند.
باکتریهای موجود در جنس Lactobacillus بدون اسپور تشکیل دهنده ، گرم مثبت ، بی تحرک بودند. باسیلهای منفی کاتالاز و نتیجه گیری در مورد آن. که میکروارگانیسم های شناسایی شده متعلق به جنس Lactobacillus هستند.
باکتریهای موجود در جنس Lcuconostoc غیر اسپور تشکیل دهنده ، گرم مثبت بودند. بدون تحرک ، کاتالاز منفی ، احاطه شده توسط کپسول کوکسی ، سپس نتیجه گیری در مورد آن. که میکروارگانیسم های شناسایی شده متعلق به جنس Leuconostoc هستند:
باکتری های گروه استرپتوکوک جنس N بدون عاری از اسپور مشاهده شد. گراموز بی تحرک ، کاتالاز منفی ، در محیط مواد مغذی با pH 9.6 و 6.5 Na NaCI رشد نمی کند. cocci سپس نتیجه گیری در مورد آن. که میکروارگانیسم های شناسایی شده متعلق به جنس گروه استرپتوکوک N هستند.
باکتری های جنس Pediocoecus به نظر می رسد غیر اسپور تشکیل دهنده ، گرم مثبت است. بی تحرک ، کاتالاز منفی (یا کاتالاز مثبت ، اما دادن یک آزمایش بنزیدین منفی) یا کوکهای مثبت سودومیزه ، نتیجه گیری در مورد این نتیجه می دهند. که میکروارگانیسم های شناسایی شده متعلق به جنس Pediocoecus هستند.
باکتریهای گونه S.thermophilus غیر سازگار بودند. مثبت بی حرکت نورد azotatel izatelnye. کوکهای لرموفیلی که در محیطهای مغذی با pH 9.6 و 6.5٪ NaCI رشد نمی کنند. برو نتیجه گیری در مورد آن. که میکروارگانیسم های شناسایی شده متعلق به گونه های Streptococcus themiophilus هستند.
5.1.3. اگر تأیید مستعمرات مشخصه در 80٪ موارد تأیید شود ، یعنی حداقل 4 از 5 کلونی رشد گروههای خاص یا جنس میکروارگانیسم ها را تأیید نمی کند ، پس اعتقاد بر این است که کلیه کلنی های مشخصه رشد یافته در یک فنجان متعلق به این گروه ، جنس یا گونه ها هستند. در موارد دیگر ، تعداد میکروارگانیسم ها بر اساس درصد کلونی های تأیید شده به تعداد کلنی های مشخصه که برای تأیید گرفته شده تعیین می شود.
5.1.4. هنگام تعیین VLF یا تلقیح محصول بر روی رسانه مایع ، لوله ها مثبت تلقی می شوند در صورتی که در طی تحقیقات بعدی بر روی رسانه های آگار و تأیید مستعمرات مشخصه ، میکروارگانیسم های گروه های تعریف شده ، جنس ها یا گونه ها حداقل در یک کلنی مشخصه یافت شوند.
5.1.5. محتمل ترین تعداد (VLF) میکروارگانیسم ها با تعداد لوله های مثبت مطابق با GOST 30425 تعیین می شود.
اگر رقت های ده برابر انتخاب شده برای کاشت بیشتر بود ، به عنوان مثال 10 -5. 10 "4 و 10" \\ سپس مقدار جدول LFM با تفاوت بین رقیق های انتخاب شده و جدول ده برابر ، یعنی 100 برابر می شود.
اگر رقت های ده برابر برای کاشت انتخاب شده بودند پایین تر بودند ، به عنوان مثال 10 درجه (1 گرم). 10 ”.. 10 2 ، سپس مقدار جدول LF با تفاوت بین رقیق های انتخاب شده و جدول ده برابر ، یعنی 10 تقسیم می شود.
5.1.6. نتایج تعیین تعداد میکروارگانیسم ها با تلقیح در ظروف پتری یا به روش H-HF یا با استفاده از روش فیلتراسیون غشایی به Ig یا 1 cm »محصول تبدیل می شود و مطابق با الزامات GOST 26670 ثبت می شود.
5.1.7. نتایج تعیین حضور میکروارگانیسم ها در یک نمونه خاص از محصول به شرح زیر بیان می شود: میکروارگانیسم های اسید لاکتیک (در صورت لزوم ، جنس یا گونه آن مشخص شده است) در نمونه محصول یافت می شود یا یافت نمی شود.
5.2 پردازش نتایج آنالیز فرآورده های شیر تخمیر شده ، کشتهای استارت ، کنسانتره باکتریها و آماده سازی باکتریایی باکتریهای اسید لاکتیک.
5.2.1. با رشد باکتریهای اسید لاکتیک در یک محیط مایع ، شیر - شیر منعقد می شود.
برای محاسبه تعداد کل باکتریهای اسید لاکتیک (استرپتوکوک و میله) ، سه رقیق آخر ذکر شده است که در آن شیر فرش شده است.
یک ویژگی عددی را بنویسید. از سه شماره تشکیل شده است که تعداد لوله\u200cهای دارای شیر پنیر را در تولید آخرین رقتها نشان می\u200cدهد. رقم اول از ویژگی عددی مربوط به رقیبی است که در آن شیر در دو لوله پیچیده شده است. اعداد زیر تعداد لوله های شیر پنیر را در دو رقیق بعدی نشان می دهد.
با توجه به ویژگی عددی جدول. 2 احتمال زیاد میکروارگانیسم های اسید لاکتیک را پیدا می کند. که با رقیبی که اولین رقم از ویژگی عددی از آن شروع می شود ضرب می شود.
|
جدول 2 |
||||||||||||||||||||||||||||||||||||
|
ترکیبات غیرقابل قبول در جدول ذکر نشده است.
تعداد حاصل مطابق با تعداد سلولهای باکتری اسید لاکتیک در 1 گرم یا 1 سانتی متر از محصول است.
چاپ مجدد نسخه رسمی ممنوع است
انتشارات استاندارد. 1989 © STANDARTINFORM. 2010
از اول ژوئیه 2002 ، GOST 24104-2001 تصویب شد. GOST R 53228-2008 در فدراسیون روسیه لازم الاجرا است.
در قلمرو فدراسیون روسیه
GOST 10444.11-89
استاندارد بین المللی
روش های تعیین میکروارگانیسم های اسید لاکتیک
نسخه رسمی
Standardinform
UDC 663 / .665.3.001.4: 006.354
گروه H09
محصولات غذایی روشهای تعیین باکتریهای اسید لاکتیک
ISS 07.100.30 OKSTU 9109
تاریخ معرفی 01.01.91
این استاندارد در مورد محصولات غذایی و شیرهای تخمیر شده ، کشتهای استارت ، کنسانتره باکتریها و آماده سازی باکتریایی باکتریهای اسید لاکتیک کاربرد دارد و روشی را برای تعیین میکروارگانیسمهای اسید لاکتیک زنده و تعداد احتمالی آنها (VLF) و همچنین روشهای تعیین در محصولات غذایی (به جز فرآورده های شیر تخمیر شده ، کشتهای استارت ، کنسانترههای باکتریایی) تعیین می کند. و آماده سازی باکتریایی باکتریهای اسید لاکتیک) باکتریهای جنس Lactobacillus ، Leuconostoc ، گروه استرپتوکوکی N از جنس Streptococcus ، Pediococcus ، S. thermophilus و تعیین شده محتمل ترین تعداد (LPC) باکتری های جنس Lactobacillus است.
این روش بر اساس بذر مقدار معینی از محصول و (یا) رقیق شدن آن در مواد مغذی انتخابی مایع یا آگارزه شده ، کشت محصولات زراعی در شرایط بهینه و در صورت لزوم تعیین خصوصیات مورفولوژیکی و بیوشیمیایی میکروارگانیسم های تشخیص داده شده و محاسبه آنها است.
این روش برای:
ایجاد انطباق شاخص های کیفیت میکروبیولوژیکی مواد غذایی و لبنیات ، کشت استارت ، کنسانتره باکتریها و آماده سازی باکتریایی باکتریهای اسید لاکتیک با الزامات مستندات اصولی و فنی.
ایجاد استریل صنعتی مواد غذایی کنسرو ؛
پیدا کردن دلایل نقایص مواد غذایی.
1.1. نمونه گیری و تهیه نمونه های مواد غذایی به جز لبنیات ، طبق GOST 26668 ، 26669.
نمونه برداری از فرآورده های شیر تخمیر شده (خشک و مایع) ، کشت استارت ، کنسانتره باکتری و آماده سازی باکتریایی باکتری های اسید لاکتیک و آماده سازی آنها برای تجزیه و تحلیل - طبق GOST 9225 * *.
1.2 مواد غذایی کنسرو شده برای نشت - براساس GOST 8756.18 - بررسی می شود.
مواد نگهدارنده كامل ، از نظر ظاهري طبيعي ، قبل از آزمايش در دماي 30-37 درجه سانتيگراد در ظروف با ظرفيت حداكثر 1 dm 3 شامل حداقل براي 5 روز ، در ظروف با ظرفيت بيش از 1 dm 3 - حداقل براي 7 روز مورد استفاده قرار مي گيرند.
محصولات غذایی که در آن تعداد میکروارگانیسم های اسید لاکتیک عادی شده است ، تحت کنترل دما نیستند.
رقیق محصولات براساس محلول پپتون نمکی طبق GOST 26669 تهیه می شود.
رقت های اولیه محصولات با کسری انبوه NaCl بیش از 5٪ با استفاده از آب پپتون تهیه می شوند. رقت های اولیه ماهی و فرآورده های گوشتی با استفاده از نمکی فیزیولوژیکی تهیه می شود.
* GOST R 53430-2009 در قلمرو فدراسیون روسیه معتبر است.
چاپ مجدد نسخه رسمی ممنوع است
© انتشارات خانه استاندارد ، 1989 © STANDARTINFORM ، 2010
برای آزمایش ، تجهیزات ، مواد ، مواد معرف مطابق با GOST 10444.1 ، GOST 9225 و موارد زیر استفاده می شود:
مقیاسهای آزمایشگاهی با هدف کلی با خصوصیات اندازه گیری مطابق با GOST 24104 * ، حداکثر حداکثر وزن تا 200 گرم و خطای خطا 2 میلی گرم mg (برای معرفهای توزین).
مقیاسهای آزمایشگاهی با هدف کلی با خصوصیات اندازه گیری مطابق با GOST 24104 * ، با حداکثر وزن حداکثر تا 200 گرم و حاشیه خطا 15 میلی گرم ((برای وزن گیری محصول).
میکروسکوپ نوری بیولوژیکی با دستگاهی برای میکروسکوپ کنتراست فاز یا مارک های مشابه دیگر. پوشش های داخلی مطابق با GOST 6672؛ عینک موضوع مطابق با GOST 9284؛
ترموستات با طیف وسیعی از دمای کار از 28-55 درجه سانتیگراد ، که اجازه می دهد درجه حرارت تنظیم شده با دقت 1 درجه سانتیگراد حفظ شود. برش پنبه مطابق با GOST 5541
ذره بین تاشو جیب ، افزایش 4-10 بار مطابق با GOST 25706؛ پانکراتین برای آماده سازی باکتریایی و ویروسی. کلروفرم فنی مطابق با GOST 20015؛
شیر کم چربی با اسیدیته بیشتر از 19 درجه سانتیگراد ، از شیر گاو تهیه شده حداقل با درجه 2 مطابق با GOST 13264 ** یا پودر شیر تهیه شده مطابق با GOST 10970 *** تهیه شود. هیدروکلراید ال-آرژنین؛ بنزیدین اساسی یا اسید هیدروکلریک؛ سیترات پتاسیم؛ کربوکسیل متیل سلولز؛ بین 80؛ استات سدیم؛ سیترات آمونیوم؛
سولفات منیزیم (MgS0 4 7H 2 0)؛
سولفات منگنز (MnS0 4 2H 2 0)؛
سولفات منگنز (MnS0 4 4H 2 0)؛
اسید سوربیک؛
نیگروسین؛
3.1 تهیه محلول های معرفها و نشانگرها برای آزمایش محصولات غذایی (بجز محصولات شیر \u200b\u200bتخمیر شده ، کشتهای استارت ، کنسانتره باکتریها و آماده سازی باکتریایی باکتریهای اسید لاکتیک)
3.1.1. نشانگر بنفش بروموکرزول ، محلول با غلظت جرم 1 گرم در روز 3: 1/0 گرم بنفش برموکروزول مطابق با قوانین آسپتیک منتقل می شود ، با آب شستشو با استریل استریل ، داخل ظرف های حجمی با ظرفیت 100 سانتی متر 3 ، حجم را با همان آب به علامت می گذاریم. محلول بیش از 3 ماه در دمای اتاق نگهداری نمی شود.
3.1.2. کربنات کلسیم ، یک سوسپانسیون آبی با غلظت جرم 30 گرم در روزانه 3: 3 گرم کربنات کلسیم ، استریل شده با توجه به GOST 10444.1 استریل می شود ، با آب شستشو شده با آب مقطر ، داخل ظرف های حجمی با ظرفیت 100 سانتی متر 3 منتقل می شود و حجم آن را به علامت می گذارد. سیستم تعلیق در دمای (1 12 121) درجه سانتیگراد به مدت 20 دقیقه استریل می شود. سیستم تعلیق بیش از 3 ماه در دمای اتاق نگهداری نمی شود.
3.1.3. کاربولفوکسین ، محلول غلیظ: 1 گرم فوکسین با 10 cm3 از 96٪ اتانول و 100 cm3 محلول فنل با غلظت جرم 50 گرم در روز در روز 3 مخلوط می شود.
برای تهیه محلول کار کربولفوکسین ، 90 cm3 آب مقطر به 10 cm 3 از محلول غلیظ کاربولفوکسین اضافه می شود.
3.1.4. محلول کریستالی بنفش با غلظت جرم 10 گرم در دسی متر 3: 1 گرم بنفشه کریستالی منتقل می شود و با آب مقطر شستشو می شود ، در یک ظرف اندازه گیری با ظرفیت 100 سانتی متر 3 ، حجم آن به علامت آورده می شود. محلول بیش از 3 ماه در دمای اتاق نگهداری نمی شود.
* از اول ژوئیه 2002 ، GOST 24104-2001 معرفی شد. GOST R 53228-2008 در قلمرو فدراسیون روسیه معتبر است.
** در قلمرو فدراسیون روسیه GOST R 52054-2003 اعمال می شود.
*** در قلمرو فدراسیون روسیه GOST R 52791-2007 معتبر است.
3.1.5. سیستم تعلیق نیگروسین با غلظت 100 گرم در دسی متر 3: 10 گرم نیگروسین منتقل می شود ، با آب مقطر شستشو می شود ، به اندازه گیری ظروف با ظرفیت 100 سانتی متر 3 ، حجم آن به علامت تنظیم می شود ، تا دمای 45-50 درجه سانتیگراد در یک حمام آب گرم می شود و سپس از طریق یک پنبه گاز فیلتر می شود فیلتر
3.1.6. محلول پپتون نمکی مطابق با GOST 26669 تهیه می شود.
3.1.7. آب پپتون مطابق با GOST 26669 تهیه می شود.
3.1.8. اسید سوربیک ، محلول قلیایی: 1 گرم اسید سوربیک منتقل می شود ، شستشو با محلول هیدروکسید سدیم با NaOH \u003d 1 mol / dm 3 ، در اندازه گیری ظروف با ظرفیت 100 سانتی متر 3 ، حجم با همان محلول با علامت تنظیم می شود. محلول حاصل با استفاده از فیلتراسیون غشایی مطابق با GOST 26670 استریل می شود.
مجاز به تهیه محلول اسید سوربیک بدون فیلتر با رعایت قوانین آسپتیک است ، در حالی که محلول هیدروکسید سدیم در آب مقطر استریل تهیه می شود.
3.1.9. معرف برای تعیین سیتوکروم ها: 1 گرم بنزیدین پایه یا هیدروکلریک اسید در 20 سانتی متر 3 از اسید استیک یخبندان 99.8٪ حل می شود ، 30 سانتی متر 3 آب مقطر اضافه می شود و به آرامی گرم می شود ، پس از خنک شدن ، 50 سانتی متر 3 از 96٪ اتانول به محلول اضافه می شود. . محلول به مدت 1 ماه در یخچال نگهداری می شود.
3.1.10. محلول نمکی مطابق با GOST 10444.1 تهیه می شود.
3.2 تهیه مواد مغذی برای آزمایش مواد غذایی (بجز محصولات شیر \u200b\u200bتخمیر شده ، کشتهای استارت ، کنسانتره باکتریها و آماده سازی باکتریایی باکتریهای اسید لاکتیک)
3.2.1. محیط متراکم Blikfeldt مطابق با GOST 10444.1 تهیه شده است.
3.2.2. محیط Blikfeldt مایع است: 10 گرم لاکتوز ، 10 گرم گلوکز ، 5 گرم پپتون در 950 cm 3 آب مقطر حل شده ، جوشانده و از طریق فیلتر کاغذی فیلتر می شود. به صافی اضافه کنید 20 سانتی متر عصاره مخمر ، محلول 32 سانتی متر 3 برموسروز بنفش و. 3.1.1 را تنظیم کنید ، pH را روی 1/7 7. 7/7 تنظیم کنید ، درون لوله\u200cهای استریل ریخته و در دمای (1 11 117) درجه سانتیگراد به مدت 20 دقیقه قرار دهید.
3.2.3. چهارشنبه Briggs ، اصلاحات شارپ:
15 گرم پپتون ، 20 گرم گلوکز ، 25 سانتی متر 3 عصاره مخمر ، 5 گرم استات سدیم ، 5 گرم فسفات پتاسیم مونواسید شده ، 2 گرم سیترات آمونیوم ، 100 سانتی متر 3 آب گوجه فرنگی به 875 cm 3 آب مقطر اضافه می شود (بر اساس این واقعیت که آب حاوی حداقل 4/5٪ مواد جامد محلول ، اگر آب گوجه فرنگی حاوی مقدار مختلفی از مواد جامد باشد ، مقدار مواد جامد 4/5٪ را مجدداً محاسبه کنید ، 1 cm 3 از بین - 80 ، 5 cm 3 از محلول نمکی (MgS0 4 7H 2 0 - 11.5 گرم ، MnS0 4 4H 2 0 - 2.86 گرم ، FeS0 4 7H 2 0 - 0.68 گرم ، آب مقطر تا 100 سانتی متر 3) ، 15 گرم آگار.
این مخلوط را روی حرارت کم جوشانده تا وقتی که آگار کاملاً حل شود. pH را طوری تنظیم کنید که پس از عقیم سازی در دمای 25 درجه سانتیگراد باشد (6/0 + 5/6). محیط در دمای (1 + 115) درجه سانتیگراد به مدت 15 دقیقه استریل می شود.
3.2.4 محیط مخمر: در 100 سانتی متر مربع عصاره مخمر تهیه شده مطابق با GOST 10444.1 ، 900 cm 3 آب مقطر ، 10 گرم کربنات کلسیم را مطابق با GOST 10444.1 و 100 گرم ساکارز اضافه کنید. این مخلوط تا زمانی که ساکارز حل شود گرم می شود ، pH تنظیم می شود به طوری که پس از عقیم سازی در دمای 25 درجه سانتیگراد (1 ± 1/7)) قرار می گیرد ، درون لوله های 10 سانتی متر 3 ریخته می شود و در دمای (1 of 121) درجه سانتیگراد می شود. 15 دقیقه
3.2.5. آگار کلم مطابق با GOST 10444.1 تهیه می شود.
3.2.6. مایع MRS مایع: 10 گرم پپتون ، 20 cm 3 عصاره مخمر ، 20.0 گرم گلوکز ، 1.0 cm 3 از tween - 80 ، 2.0 گرم فسفات پتاسیم که 5 عدد از آن جدا شده است ، در یک فلاسک حجمی با ظرفیت 1.0 dm 3 قرار داده می شود. ، 0 گرم استات سدیم ، 2.0 گرم سیترات تریامونیوم ، 0.2 گرم سولفات منیزیم ، 0.05 گرم سولفات منگنز (MnS0 4 4H 2 0) ، آب گوشت را به آن اضافه کنید. قطعات را با گرم کردن در حمام آب حل کرده و pH را تنظیم کنید تا پس از عقیم سازی در دمای 25 درجه سانتیگراد قرار گیرد (6.2 + 0.1). محیط را به مدت 10 سانتی متر در لوله های استریل ریخته و در اتوکلاو در دمای (1 12 121) درجه سانتیگراد به مدت 15 دقیقه ریخته می شود. لوله های آزمایش شده با یک ماده مغذی در دمای (4 + 1) درجه سانتیگراد بیش از 30 روز ذخیره نمی شوند.
3.2.7 محیط MPC Agarized مطابق دستور العمل ذکر شده در و. 3.2.6 ، با افزودن 15-18 گرم آگار. پس از حل کردن اجزاء ، محیط را درون گلدانهای استریل ریخته و در اتوکلاو در دمای (1 12 121) درجه سانتیگراد به مدت 15 دقیقه ریخته می شود. محیط نهایی به مدت بیش از 30 روز در دمای (4 + 1) درجه سانتیگراد نگهداری می شود.
در صورت لزوم ، برای افزایش انتخاب ، پس از عقیم سازی ، 1 سانتی متر 3 از محلول قلیایی اسید سوربیک به 1 میلی متر مکعب از محیط آگار یا مایع اضافه می شود. 3.1.8.
3.2.8. محیط آبگوشت پپتون گوشت با pH 9.6:
در گوشت و مایع پپتون که مطابق با GOST 10444.1 تهیه شده است ، pH با استفاده از محلولهای قلیایی و اسید مطابق با GOST 10444.1 تنظیم می شود به طوری که پس از عقیم سازی ، 9.6 در 25 درجه سانتیگراد است. این ماده در دمای (1 12 121) درجه سانتیگراد به مدت 20 دقیقه استریل می شود.
3.2.9. آبگوشت گوشت پپتون با کلرید سدیم 6.5٪ مطابق با GOST تهیه می شود
10444.1 ، اما هنگام پخت و پز مقدار کلرید سدیم اضافه شده را به 65 گرم در هر محیط DM 3 افزایش دهید.
3.2.10 مواد مغذی آگار با ساکارز:
100.0 گرم ساکارز ، 15.0 گرم آگار به آب گوجه فرنگی 1 میلی متر مکعب 3 اضافه می شود ، به طور دوره ای هم بزنید ، این مخلوط تا جوش و انحلال کامل همه اجزا گرم می شود.
محیط تا 45-55 درجه سانتیگراد سرد می شود و pH تنظیم می شود به طوری که پس از عقیم سازی در دمای 25 درجه سانتیگراد قرار می گیرد (1/1 7 7/7).
محیط را درون گلدان ها ریخته و به مدت 15 دقیقه با دمای (1+ 121) درجه سانتیگراد استریل می شود. پس از استریلیزاسیون و بررسی pH ، محیط به خوبی مخلوط می شود و درون ظروف پتری ریخته می شود و در دمای (4 + 1) درجه سانتیگراد بیش از 14 روز ذخیره می شود.
3.2.11 ردی متوسط: پایه متوسط \u200b\u200b- 15.0 گرم آگار به گلدان حاوی 500 سانتی متر 3 آب مقطر اضافه می شود و تا زمانی که آگار حل شود در یک حمام آب گرم می شود. در یک فلاسک دیگر حاوی 500 سانتی متر 3 آب مقطر ، 10.0 گرم سیترات پتاسیم و 15.0 گرم کربوکسی متیل سلولز اضافه شده و با گرم شدن حل می شود. محتویات هر دو فلاسک مخلوط شده و 3.0 گرم پپتون ، 25 سانتی متر 3 عصاره مخمر ، 1.25 گرم فسفات پتاسیم حل شده ، 5.0 گرم هیدروکلراید L-arginine اضافه می شود ، در یک حمام آب گرم می شود تا زمانی که اجزای کاملاً حل شوند ، تا دمای 45-55 سرد شوند درجه سانتیگراد را تنظیم کرده و pH را طوری تنظیم کنید که پس از عقیم سازی در دمای 25 درجه سانتیگراد قرار گیرد (0.2 6. 6.3). اساس این ماده در دمای (1+ 121 درجه سانتیگراد) به مدت 15 دقیقه استریل می شود و در دمای (4 + 1) درجه سانتیگراد بیش از 30 روز ذخیره می شود.
برای تهیه یک ماده غذایی مغذی ، 5.0 سانتی متر 3 از شیر بدون چربی استریل ، 100 سانتی متر 3 تعلیق کربنات کلسیم با غلظت جرم 30 گرم در دسی متر 3 و 2 سانتی متر 3 از محلول غلظت جرم برمید بنفش به 1 dm 3 از مذاب اضافه می شود و به پایه 45-55 درجه سانتیگراد سرد می شود. 1 گرم در روز 3.
3.2.12 محیط روگوز مایع است: 10.0 گرم پپتون در یک فلاسک حجمی با ظرفیت 1.0 dm 3 قرار می گیرد ،
25.0 cm 3 عصاره مخمر ، 20.0 گرم گلوکز ، 1.0 cm 3 از tween - 80 ، 6.0 گرم فسفات پتاسیم به صورت منزوی ، 2.0 گرم سیترات آمونیوم ، 25.0 گرم استات سدیم ، 1.32 سانتی متر 3 یخ استیک اسید ، 0.575 گرم سولفات منیزیم ، 0.12 گرم سولفات منگنز (MnS0 4 2H 2 0) ، 0.034 گرم سولفات آهن ، آب مقطر به مارک اضافه می شود ، اجزای آن با گرم کردن در حمام آب حل می شوند و pH تنظیم می شود به طوری که پس از عقیم سازی در جای خود قرار می گیرد. 25 درجه سانتیگراد (5/1 + 5). محیط را به مدت 10 سانتی متر در لوله های استریل ریخته و در اتوکلاو در دمای (1 12 121) درجه سانتیگراد به مدت 15 دقیقه ریخته می شود. لوله های آزمایش شده با یک ماده مغذی در دمای (4 + 1) درجه سانتیگراد بیش از 30 روز ذخیره نمی شوند.
3.2.13. محیط Agaric Rogosa مطابق دستور العمل توصیف شده در و. 3.2.12 ، با افزودن
20.0 گرم آگار. پس از حل کردن اجزاء ، محیط را درون گلدانهای استریل ریخته و در اتوکلاو در دمای (1 12 121) درجه سانتیگراد به مدت 15 دقیقه ریخته می شود. محیط نهایی به مدت بیش از 30 روز در دمای (4 + 1) درجه سانتیگراد نگهداری می شود.
3.2.14. محیط حاصل از آب گوجه فرنگی مطابق با GOST 10444.1 تهیه شده است.
3.2.15. متوسط \u200b\u200bبرای تعیین pseudocatalase: در یک فلاسک حجمی با ظرفیت 1 dm 3 مکان
5.0 پپتون ، 25 سانتی متر مربع عصاره مخمر ، 0.5 سانتی متر 3 عدد تونس - 80 ، 0.1 گرم (MnS0 4 4Н 2 0) ، 0.5 گرم گلوکز ، 15 گرم آگار آبگوشت گوشت پپتون را به مارک اضافه کنید ، اجزا را با گرم کردن حل کنید در حمام آب قرار داده و pH را طوری تنظیم کنید که پس از عقیم سازی در دمای 25 درجه سانتیگراد قرار گیرد (9/6 6. 6/6). این مواد را در لوله های آزمایش 5-7 سانتی متر 3 ریخته و در اتوکلاو با دمای (1 12 121) درجه سانتیگراد به مدت 15 دقیقه ریخته می شود. پس از عقیم سازی ، لوله ها روی سطح متمایل قرار می گیرند تا از جمب ها بدست آیند.
3.2.16. چهارشنبه لی:
اساس متوسط \u200b\u200b- 10.0 گرم پپتون ، 50 سانتی متر 3 عصاره مخمر ، 5.0 گرم لاکتوز ، 3.0 گرم کربنات کلسیم با استریل بر اساس GOST 10444.1 ، 0.5 گرم Na2 HP0 4 در یک فلاسک حجمی با ظرفیت 1 dm 3 قرار می گیرد ، 18 گرم آگار ، با آب مقطر به علامت اضافه كنید ، اجزاء را با گرم كردن در حمام آب حل كنید و pH را تنظیم كنید تا پس از عقیم سازی در دمای 25 درجه سانتیگراد باشد (1 7 7.0). این ماده در اتوکلاو در دمای (1 12 121) درجه سانتیگراد به مدت 20 دقیقه استریل می شود و در صورت لزوم در دمای (4 + 1) درجه سانتیگراد بیش از 30 روز ذخیره نمی شود.
برای تهیه یک ماده غذایی مغذی ، 20 سانتی متر 3 از محلول استریل برموکرزول بنفش با غلظت جرم 1 گرم در روز در روز 3 به 1 dm 3 پایه اضافه می شود ، مخلوط شده و داخل ظرف های پتری ریخته می شود. محیط در دمای (4 + 1) درجه سانتیگراد بیش از 7 روز ذخیره نمی شود.
3.3 تهیه محیط کشت برای آزمایش فرآورده های شیر تخمیر شده ، کشت های اولیه ، کنسانتره باکتری ها و آماده سازی باکتریایی باکتری های اسید لاکتیک
3.3.1. تهیه شیر هیدرولیز
شیر بدون چربی طبیعی یا بازسازی شده به مدت 20 دقیقه با جوشان بخار شده درمان می شود و تا دمای (45 + 2) درجه سانتیگراد سرد می شود. اسیدیته فعال با افزودن محلول آبی با کسری جرم NaOH 40٪ به pH (7/1 7/7) تنظیم شد. 0.5 تا 1.0 گرم پودر پانکراتین به 1000 سانتی متر 3 شیر اضافه می شود. سپس 5 تا 6 سانتی متر 3 کلروفورم به شیر اضافه می شود. فلاسک با یک درپوش چوب پنبه بسته می شود و در دمای (40 + 2) درجه سانتیگراد به مدت 18-24 ساعت نگه داشته می شود در طی 3-5 ساعت اول شیر 2-3 بار مخلوط می شود (پس از همزن برای جلوگیری از حذف کلروفرم ، بازکن کمی باز می شود).
سپس شیر هیدرولیز شده از طریق فیلتر کاغذی فیلتر می شود ، با آب مقطر به نسبت 1: 1 رقیق می شود ، pH فعال با افزودن محلول آبی با کسری انبوه از NaOH 40٪ به pH (7.1 + 0.1) تنظیم می شود و برای تهیه آگار با شیر هیدرولیز شده استفاده می شود. در صورت ذخیره سازی ، شیر هیدرولیز شده در اتوکلاو در دمای (1 12 121) درجه سانتیگراد به مدت 15 دقیقه استریل می شود.
3.3.2. تهیه آگار با شیر هیدرولیز شده
شیر هیدرولیز ، cm3 - 1000؛
آگار ، گرم - 15.
به 1000 سانتی متر 3 شیر آب هیدرولیز 15 گرم آگار اضافه کنید. این محفظه تا زمانی که آگار کاملاً ذوب شده و از طریق پشم پنبه فیلتر شود ، گرم می شود و درون لوله های آزمایش یا فلاسک ها ریخته می شود و در اتوکلاو در دمای (1 12 121) ° С به مدت (10 + 1) دقیقه استریل می شود.
3.3.3. تهیه شیر کم چربی استریل
شیر بدون چربی طبیعی یا بازسازی شده در لوله های 10 سانتی متر 3 ریخته می شود و در دمای (1 12 121) درجه سانتیگراد به مدت (10 + 1) دقیقه استریل می شود.
4.1.1. برای تعیین میکروارگانیسم ها با استفاده از یک نمونه آماده از محصول یا رقیق شدن اولیه آن.
برای تعیین حضور و شمارش تعداد میکروارگانیسم های موجود در ظروف پتری از یک نمونه از محصول غذایی یا از رقت اولیه ، تعدادی رقیق سازی مطابق با تعداد مجاز میکروارگانیسم های موجود در مستندات نظارتی و فنی برای نوع خاصی از محصول غذایی تهیه می شود.
برای محاسبه LDP از نمونه محصول غذایی ، یک سری اولیه و یک سری رقت ده برابر تهیه می شود تا میکروارگانیسم ها در محصولات بالاترین رقت شناسایی نشوند. برای کاشت حداقل سه رقیق متوالی انتخاب می شوند. از هر رقیق سه لوله موازی بذر می شود.
4.1.2. برای تلقیح در محیط مایع به روش ظروف UHF و پتری ، 1.0 سانتی متر 3 از نمونه تهیه شده محصول و (یا) رقیق شدن آن به روش عمیق انجام می شود ، برای کاشت در ظروف پتری با روش سطح - 0.1-0.2 cm 3.
محصولات زراعی با روش های عمیق یا سطح و همچنین با استفاده از فیلتراسیون غشایی ، مطابق با GOST 26670 انجام می شود.
هنگام استفاده از روش فیلترهای غشایی ، حجم یک محصول مایع را فیلتر کنید ، که در مستندات هنجاری و فنی برای یک نوع خاص از محصول غذایی ذکر شده است.
4.1.3. به منظور تعیین حضور یا شمارش میکروارگانیسم های اسید لاکتیک UHF ، کاشت در یکی از رسانه های مایع مشخص شده در پاراگراف ها انجام می شود. 3.2.2 ، 3.2.6 یا 3.2.12.
اگر پس از افزودن محصول به محیط Blikfeldt ، رنگ آن تغییر کند ، پس از آن چند قطره از محلول قلیایی استریل (NaOH یا KOH) با غلظت جرم 50 گرم در روز در روز 3 برای بازیابی رنگ اصلی اضافه می شود.
برای تعیین حضور یا تعداد تعداد میکروارگانیسم های اسید لاکتیک ، مجاز است به جای تلقیح کردن در یکی از رسانه های آگرای شده مشخص شده در بندهای 3.2.1 ، 3.2.5 ، 3.2.7 ، 3.2.13 یا 3.2.14 ، تلقیح شده را در محیط مایع انجام دهید.
برای تعیین وجود یا شمارش باکتریهای LF از جنس Lactobacillus ، کاشت در یکی از رسانه های مایع مشخص شده در پاراگراف ها انجام می شود. 3.2.6 یا 3.2.12.
برای تعیین وجود یا تعداد تعداد باکتری های جنس Lactobacillus ، به جای آبکاری در محیط مایع ، کاشت با استفاده از روش عمیق در یکی از محیط های آگار مشخص شده در پاراگراف ها انجام می شود. 3.2.7 یا 3.2.13.
برای تعیین وجود باکتری های جنس Leuconostoc ، کاشت در محیط مایع مشخص شده در بند 3.2.4 انجام می شود.
به منظور تعیین حضور به جای استفاده از یک مایع مایع ، و همچنین شمارش تعداد باکتریهای جنس Leuconostoc روی ظروف پتری و یا با استفاده از روش فیلتراسیون غشایی ، سطح روی یک محیط آگار مشخص می شود که در بند 3.2.10 مشخص شده است.
برای تعیین وجود یا تعداد تعداد استرپتوکوکهای گروه N از جنس Streptococcus ، از تلقیح شده در محیط آگار که در بند 3.2.11 ذکر شده است تلقیح می شود و برای S.thermophilus از محیطی مطابق بند 3.2.16 استفاده می شود.
برای تعیین تعداد یا تعداد تعداد باکتری های جنس Pediococcus ، تلقیح شده در محیط آگار مشخص شده در بند 3.2.3 انجام می شود.
4.1.4. محصولات زراعی برای تعیین حضور یا تعداد تعداد میکروارگانیسم های اسید لاکتیک ، باکتری جنس Lactobacillus streptococci از گروه N جنس Streptococcus به مدت بیش از 5 روز در دمای (30 + 1) درجه سانتیگراد یا بیش از 3 روز در دمای (1 + 37) درجه سانتی گراد انکوبه می شوند. محصولات زراعی برای تعیین حضور یا تعداد تعداد باکتریهای جنس Leuconostoc به مدت بیش از 5 روز در دمای (22+ درجه سانتیگراد) انکوبه می شوند. محصولات زراعی برای تعیین حضور یا تعداد S.thermophilus (3/48) در دمای (45 + 1) درجه سانتی گراد انکوبه می شوند. محصولات زراعی روی ظروف پتری برای جوجه کشی در حضور یا تعداد باکتری های جنس Leuconostoc ، وارونه می شود.
جوجه کشی محصولات زراعی در رسانه های مایع هنگام نشانه های قابل مشاهده متوقف می شود
شمارش مقدماتی مستعمرات در رسانه های آگار پس از 48 ساعت انجام می شود
4.1.5. در محصولات زراعی روی محاصره شده برای تعیین میزان یا تعداد تعداد میکروارگانیسم های اسید لاکتیک ، باکتری های جنس Lactobacillus ، گروه Pediococcus streptococcus N از جنس Streptococcus ، S.thermophilus ، محدودیت دسترسی مطابق با GOST 30425 یا یکی از روشهای زیر انجام می شود:
بر روی مواد مغذی جامد شده در ظروف پتری ، یک لایه دوم از مواد آهک مذاب و سرد شده تا (45 + 1) درجه سانتیگراد به مقدار 5 cm 5 سانتی متر مربع ریخته و برای سفت شدن باقی می ماند.
ظروف پتری در محیط گازی متشکل از 95٪ N 2 و 5٪ CO 2 قرار می گیرد.
ظروف پتری در بی هوازی قرار می گیرد. دستگاه بسته است ، با استفاده از پمپ خلاء خلاء 86.6-93.3 kPa ایجاد می شود.
پارافین مایع استریل با یک ماده مایع به مقدار لازم برای بدست آوردن ستونی در حدود 2 سانتی متر به هر لوله اضافه می شود.
4.1.6. محصولات زراعی روی رسانه های مایع روزانه لوله های اسکن شده و منتخب با علائم قابل توجهی از رشد می شوند. ماهیت رشد در رسانه های مایع در پیوست 2 آورده شده است. از لوله هایی که علائم رشد دارند ، روی رسانه های آگارزه شده تحقیق شده است (به بند 4.1.3 مراجعه کنید) با یک حلقه باکتریولوژیکی انجام می شود تا رشد کلنی های جدا شده بدست آید. محصولات زراعی طبق بند 4.1.4 جوجه کشی می شوند.
4.1.7. محصولات زراعی روی محاصره شده پس از انکوباسیون بررسی شده و ظروف پتری برای شمارش انتخاب می شوند که از این تعداد 15 تا 150 کلنی مشخصه رشد کرده اند.
هنگام تعیین تعداد میکروارگانیسم ها به روش فیلترهای غشایی ، مجاز به انتخاب تعداد ظروف پتری برای شمارش است اگر کمتر از 15 کلنی مشخصه روی فیلترها رشد کرده باشند.
خصوصیات مستعمرات مشخصه در پیوست 2 آورده شده است.
4.1.8. برای تأیید تعلق مستعمرات مشخصه به میکروارگانیسم های لاکتیک یا باکتری های یکی از جنس های Lactobacillus ، Leuconostoc ، Pediococcus streptococci از گروه N جنس Streptococcus ، S.thermophilus ، حداقل 5 کلونی مشخصه مطابق بند 4.1.7 یا 4.1.6 از محصولات زراعی انتخاب می شوند. وابستگی هر کلونی منتخب به میکروارگانیسم های خاصی در رابطه با لکه گرم ، تحرک ، وجود کاتالاز برقرار می شود ، علاوه بر این ، هنگام شناسایی باکتری های جنس Leuconostos ، وجود کپسول ها مشخص می شود ، هنگامی که استرپتوکوک ها مشخص می شوند.
از گونه های S.thermophilus و گروه استرپتوکوکی N استرپتوکوک N - رشد در گوشت و مزارع پپتون با pH 9.6 و در گوشت و پپتون با 6.5 Na NaCl.
4.1.8.1. برای تعیین نسبت میکروارگانیسم ها به لکه های گرم ، از کلنی ها اسمیر تهیه می شود که مطابق با GOST 30425 و میکروسکوپی رنگ آمیزی می شوند.
4.1.8.2. برای مطالعه تحرک میکروارگانیسم ها ، مستعمرات از طریق کلنی ها به روش قطره آویزان یا خرد شده و میکروسکوپی تهیه می شوند. نتایج میکروسکوپی مطابق با پیوست 1 ارزیابی می شود.
4.1.8.3. فعالیت کاتالاز فرهنگها مطابق با GOST 30425 تعیین می شود.
نتایج تعیین فعالیت کاتالاز مطابق با پیوست 1 ارزیابی می شود.
تجزیه پراکسید هیدروژن در باکتری های جنس Pediococcus به دلیل آنزیم pseudocatalase امکان پذیر است. بنابراین ، هنگام تعیین میکروارگانیسم های لاکتیک یا باکتری های جنس Pediococcus ، اگر میکروارگانیسم های گرم مثبت و بدون تحرک که واکنش کاتالیز مثبت دارند در کلنی های مشخصه تشخیص داده می شوند ، عدم وجود سیتوکروم ها با تنظیم آزمایش بنزیدین کنترل می شود. برای این کار ، کلنی های باکتریایی 24-48 ساعته که روی ظروف پتری پرورش یافته اند با محلول بنزیدین نشان داده شده در و ریخته می شوند. 3.1.9. پس از اشباع محلول با کلنی ها ، تقریباً همان حجم 5٪ پراکسید هیدروژن به فنجان اضافه می شود. میکروارگانیسم های اسید لاکتیک ، از جمله باکتری های جنس Pediococcus ، فاقد سیتوکروم هستند. در حضور سیتوکرومها ، مستعمرات به رنگ آبی مایل به سبز یا آبی روشن دیده می شوند.
در صورت عدم وجود بنزیدین ، \u200b\u200bتعیین وجود pseudocatalase در محیط و. 3.2.15 با غلظت کم گلوکز - 0.05٪.
محصولات زراعی توسط و جوجه کشی می شوند. 4.1.4 ، تعیین pseudocatalase و همچنین کاتالاز طبق GOST 30425 انجام می شود.
فرهنگهای تشکیل دهنده pseudocatalase به جنس Pediococcus تعلق دارند.
4.1.8.4. هنگام شناسایی باکتری های جنس Leuconostoc ، آماده سازی ها با توجه به Storm برای شناسایی کپسول های باکتریایی تهیه و آغشته می شوند. برای انجام این کار ، بر روی یک اسلاید شیشه ای به خوبی چرب و خزدار ، قطره یک فرهنگ باکتریایی با یک پودر ریز از لاشه سیاه یا تعلیق نیگروسین مخلوط می شود.
با استفاده از یک لیوان دیگر با لبه های صیقلی ، یک اسمیر نازک به سرعت تهیه می شود که چندین بار از طریق شعله مشعل برطرف می شود. اسمیر با محلول بنفشه کریستالی یا محلول کاربولکسین رنگ آمیزی می شود. به آرامی در یک ظرف با آب شسته شده ، در هوا بگذارید تا خشک شود و میکروسکوپ شود. مجاز به خشک کردن یک لکه بین ورق های کاغذ فیلتر نیست. پس زمینه دارو با تعلیق نازک ریمل سیاه یا نیگروسین رنگ آمیزی می شود. بدن باکتری ها به صورت تک رنگ رنگ آمیزی می شوند ، کپسول ها بدون رنگ باقی می مانند.
4.1.8.5. هنگام شناسایی استرپتوکوکهای گروه N از جنس استرپتوکوک ، استرپتوکوک گونه S. thermophilus ، عدم رشد بر روی مایع گوشتی-پپتون با pH 9/9 و آبگوشت گوشت پپتون با محتوای کلرید سدیم 6.5 درصد تعیین شد.
برای این فرهنگ توسط و. 4.1.8 در محیط مشخص شده در pi کشت داده می شود. 3.2.8 و 3.2.9.
محصولات زراعی در دمای (30 + 1) درجه سانتیگراد به مدت 3 روز و پس از شناسایی انکوبه می شوند
محصولات ترموفیلوس S. thermophilus به مدت 3 روز در دمای (45 + 1) درجه سانتیگراد انکوبه می شوند.
4.2.1. تهیه رقیق کننده محصولات شیر \u200b\u200bتخمیر شده (خشک و مایع) مطابق با GOST 9225.
برای تهیه رقیق شدن کشتهای استارت ، کنسانتره های باکتریایی و آماده سازی باکتریایی باکتریهای اسید لاکتیک ، لبه های بطری و بسته بندی با الکل پاک می شوند ، لبه بطری سوخته و چوب پنبه برداشته می شود ، لبه بسته بسته شده با قیچی پروفیل شده برش داده می شود ، 1 گرم مواد تست شده در ملات استریل یا پروفیل قرار داده می شود ، با یک درب از ظرف پتری و یا استریل پوشانده می شود. با استفاده از کاغذ نمک زده شده ، مقدار کمی از محلول کلرید سدیم یا بافر فسفات را از یک فلاسک حاوی محلول 99 میلی متر 3 یا بافر اضافه کنید. مواد معلق با محلول باقیمانده کلرید سدیم یا فسفات سولفات داخل فلاسک ریخته می شود و رقت دوم 1: 100 دریافت می کند.
و رقیق دوم فرآورده های شیر تخمیر شده ، کشتهای استارت ، کنسانتره باکتریها و ترکیبات باکتریایی باکتریهای اسید لاکتیک ، رقتهای زیر مطابق با تعداد باکتریهای اسید لاکتیک ذکر شده در مستندات هنجاری و فنی ، با استفاده از جدول تهیه می شوند. 1
جدول 1
4.2.2 کاشت برای شمارش تعداد استرپتوکوکهای لاکتی در یک ماده غذایی مایع آگارزه شده یا مایع تهیه شده مطابق با پی انجام می شود. 3.3.2 و 3.3.3 ، و برای شمارش تعداد باسیل های اسید لاکتیک - در یک محیط مایع تهیه شده مطابق با بند 3.3.3.
برای تلقیح در یک ماده مغذی مواد مغذی ، آن رقیق ها انتخاب می شوند که وقتی روی صفحات کاشته می شوند ، از 15 تا 150 کلنی رشد می کنند.
از هر نمونه ، تلقیح با توجه به GOST 9225 1 سانتی متر 3 از رقیق کننده های مناسب محصول (به جدول 1 مراجعه کنید) روی ظروف پتری.
وقتی از سه یا چهار رقت آخر به یک ماده غذایی مایع مایع تلقیح می شود (به جدول 1 مراجعه کنید) ، 1 سانتی متر 3 از هر رقت به دو لوله موازی با شیر کم چربی استریل وارد می شود.
4.2.3 لوله های آزمایش یا ظروف پتری با تلقیح در یک ترموستات قرار داده شده و برای شمارش باکتریهای اسید لاکتیک مزوفیلیک اسید ، در دمای (1 + 40) درجه سانتیگراد برای شمارش باکتریهای اسید لاکتیک ترموفیلیک و در (32 + 1) درجه سانتیگراد انکوبه می شوند. شمارش مشترک باکتریهای اسید لاکتیک مزوفیلیک و ترموفیلیک اسید. محصولات زراعی برای 72 ساعت انکوبه شدند
5.1.1. نتایج تجزیه و تحلیل محصول غذایی برای هر نمونه به طور جداگانه ارزیابی می شود.
5.1.2. در صورت بررسی خصوصیات فرهنگی ، مورفولوژیکی و بیوشیمیایی در تعیین:
میکروارگانیسم های اسید لاکتیک میله های گرم مثبت ، بدون تحرک ، کاتالاز منفی یا میله های غیر اسپور سازنده ، گرم مثبت ، بی تحرک ، کاتالاز منفی یا تشکیل دهنده کوکسی pseudocatalase را تشخیص دادند ، نتیجه می گیرند که میکروارگانیسم های شناسایی شده اسید لاکتیک هستند.
باکتریهای جنس Lactobacillus ، باسیلهای غیر اسپور تشکیل دهنده ، گرم مثبت ، بدون تحرک ، کاتالاز منفی یافت شد ، سپس نتیجه می گیرند که میکروارگانیسم های شناسایی شده متعلق به جنس Lactobacillus هستند.
باکتریهای موجود در جنس Leuconostoc ، بدون اسپور تشکیل دهنده ، گرم مثبت ، بدون تحرک ، کاتالاز منفی ، که توسط یک کپسول کوکسی احاطه شده است ، یافتند و نتیجه می گیرند که میکروارگانیسم های شناسایی شده متعلق به جنس Leuconostoc هستند.
باکتریهای گروه Streptococcus جنس N بدون اسپور تشکیل دهنده ، گرم مثبت ، بدون تحرک ، کاتالاز منفی بودند که در محیطهای مغذی با pH 9/9 و 6.5 درصد NaCl ، کوکسی رشد نمی کنند ، سپس نتیجه می گیرند که میکروارگانیسم های شناسایی شده متعلق به جنس گروه استرپتوکوک N هستند.
باکتریهای جنس Pediococcus غیر اسپور تشکیل دهنده ، گرم مثبت ، بدون تحرک ، کاتالاز-منفی (یا کاتالاز مثبت ، اما با دادن یک آزمایش بنزیدین منفی) یا کوکسی های pseudocatalysis مثبت را تشخیص دادند ، سپس نتیجه می گیرند که میکروارگانیسم های شناسایی شده متعلق به جنس Pediococcus هستند.
باکتریهای گونه S.thermophilus ، بدون اسپور تشکیل دهنده ، گرم مثبت ، بدون تحرک ، کاتالیز منفی ، گرمازدایی ، گرما یافته شده که در محیطهای مغذی با pH 9/9 و 6.5 درصد NaCl رشد نمی کنند ، نشان می دهد که میکروارگانیسم های شناسایی شده متعلق به گونه های Streptococcus thermophilus هستند.
5.1.3. اگر هنگام تأیید مستعمرات مشخصه ، در 80٪ موارد ، یعنی حداقل در 4 از 5 کلنی ، رشد برخی از گروهها یا جنس میکروارگانیسم ها تأیید شود ، در این صورت اعتقاد بر این است که کلیه مستعمرات مشخصه رشد یافته در یک فنجان متعلق به این گروه ، جنس یا گونه است. در موارد دیگر ، تعداد میکروارگانیسم ها بر اساس درصد کلونی های تأیید شده به تعداد کلنی های مشخصه که برای تأیید گرفته شده تعیین می شود.
5.1.4. هنگام تعیین VLF یا هنگام تلقیح یک محصول روی رسانه مایع ، لوله ها مثبت تلقی می شوند ، اگر در طول تحقیقات بعدی بر روی رسانه های آگار و تأیید مستعمرات مشخصه ، میکروارگانیسم های گروه های تعریف شده ، جنس ها یا گونه ها حداقل در یک کلنی مشخصه یافت شوند.
5.1.5. محتمل ترین تعداد (VLF) میکروارگانیسم ها با تعداد لوله های مثبت مطابق با GOST 30425 تعیین می شود.
اگر رقت های ده برابر انتخاب شده برای کاشت بیشتر بود ، به عنوان مثال 10_3 ، 10 -4 و 10 -5 ، در این صورت مقدار جدولی UHF با اختلاف بین رقیق های ده برابر انتخاب شده و جدولی ، یعنی 100 ضرب می شود.
اگر رقت های ده برابر انتخاب شده برای کاشت کمتر باشد ، به عنوان مثال 10 درجه (1 گرم) ، 10 -1 ، 10 -2 ، در این صورت مقدار جدولی UHF با تفاوت بین رقیق های ده برابر انتخاب شده و جدولی تقسیم می شود ، یعنی 10.
5.1.6. نتایج تعیین تعداد میکروارگانیسم ها با تلقیح در ظروف پتری یا با روش VHF یا با استفاده از روش فیلتراسیون غشایی بر روی 1 گرم یا 1 سانتی متر 3 محصول محاسبه می شود و مطابق با الزامات GOST 26670 ثبت می شود.
5.1.7. نتایج تعیین حضور میکروارگانیسم ها در یک نمونه خاص از محصول به شرح زیر بیان می شود: میکروارگانیسم های اسید لاکتیک (در صورت لزوم ، جنس یا گونه آن مشخص شده است) در نمونه محصول یافت می شود یا یافت نمی شود.
5.2.1. با رشد باکتریهای اسید لاکتیک در یک محیط مایع ، شیر - شیر منعقد می شود.
برای محاسبه تعداد کل باکتریهای اسید لاکتیک (استرپتوکوک و میله) ، سه رقیق آخر ذکر شده است که در آن شیر فرش شده است.
یک ویژگی عددی را بنویسید. از سه عدد تشکیل شده است که تعداد لوله های شیر گشاد شده را در سه رقت آخر نشان می دهد. رقم اول از ویژگی عددی مربوط به رقیبی است که در آن شیر در دو لوله پیچیده شده است. اعداد زیر تعداد لوله های شیر پنیر را در دو رقیق بعدی نشان می دهد.
با توجه به خصوصیات عددی جدول. 2 محتمل ترین تعداد میکروارگانیسم های اسید لاکتیک را پیدا می کنند ، که با رقیق سازی که از آن ابتدا رقم اول عددی شروع می شود ، ضرب می شود.
جدول 2
ترکیبات غیرقابل قبول در جدول ذکر نشده است.
تعداد حاصل با تعداد سلولهای باکتری اسید لاکتیک در 1 گرم یا 1 سانتی متر 3 محصول مطابقت دارد.
نمونه ای از محاسبه محتمل ترین تعداد میکروارگانیسم ها در صورت آلوده بودن دو لوله موازی در پیوست 3 آورده شده است.
اگر لازم است به طور متفاوتی تعداد استرپتوکوک ها و میله ها را تعیین کنید ، از بین لوله هایی که شیر در آنها پیچیده شده است ، یک آماده سازی میکروسکوپی را مطابق با GOST 9225 تهیه کنید ، به آن نگاه کنید و به طور جداگانه لوله هایی را که در آن میله ها و استرپتوکوک ها وجود دارد ، یادداشت کنید.
محاسبه تعداد استرپتوکوک های لاکتیک یا میله ها همانطور که در بالا گفته شد انجام می شود.
5.2.2. شمارش تعداد کلنی های رشد یافته باکتری های اسید لاکتیک در محیط آگار و محاسبه مجدد محتویات آنها در 1 گرم یا یک سانتی متر 3 از محصول مطابق با GOST 9225 انجام می شود.
ضمیمه 1 زمینه
ویژگی های میکروارگانیسم
نام میکروارگانیسم ها
ویژگی
میکروارگانیسم های اسید لاکتیک (به استثنای جنس Sporolacto-bacillus که مطابق با GOST 30425 مشخص شده است)
باکتری های لاکتوباسیلوس
باکتری های تشکیل دهنده مخاط از جنس Leuconostoc
گروه استرپتوکوک N از جنس استرپتوکوک
باکتری های جنس Pediococcus
استرپتوکوکوس S.thermophilus
باسیلهای غیر اسپور تشکیل دهنده ، گرم مثبت ، بدون تحرک ، کاتالاز منفی یا غیر اسپور تشکیل دهنده ، گرم مثبت ، بی تحرک ، کاتالاز منفی یا تشکیل دهنده کوکسی pseudocatalase
باسیلهای گرم مثبت ، بدون اسپور تشکیل بیسیلی کوتاه یا طولانی ، بدون تحرک ، کاتالاز منفی
گرم مثبت ، بدون اسپور تشکیل شده ، کروی یا بیضی شکل ، مرتب شده به صورت جفت یا زنجیر ، محاصره شده توسط کپسولی که مطابق با گرم ، کوکسی های بدون تحرک کاتالاز و لکه ها ایجاد نمی شود.
تشکیل گرم مثبت ، بدون اسپور ، مرتب شده در قالب زنجیرهای کوتاه و بلند ، بی تحرک ، منفی و کاتالاز ، در محیط مواد مغذی با pH 9.6 و 6.5٪ NaCl cocci Grum مثبت ، غیر اسپور ، به صورت جفت و تتراش ، مرتب شده به صورت جفت و تتراش ، کوکسی بدون حرکت ، کاتالاز منفی یا تشکیل دهنده pseudocatalysis
گرم مثبت ، مرتب شده به صورت جفت یا به صورت زنجیرهای کوتاه یا بلند ، بی تحرک ، منفی و کاتالاز ، گرماسفر ، در محیط های مغذی با pH 9/6 و 6.5 درصد سدیم NaCl رشد نمی کند.
ضمیمه 2 زمینه
ویژگی های کلونی میکروارگانیسم های اسید لاکتیک بر رشد و مشخصه رشد بر روی داروهای مایع
|
میکروارگانیسم ها |
محیط فرهنگی |
خصوصیات کلونی ها یا الگوی رشد در یک محیط مایع |
|
میکروارگانیسم های اسید لاکتیک |
مایع Blikfeldt |
تغییر رنگ محیط از بنفش به زرد ، کدورت محیط و یا تشکیل رسوب ، تکامل گاز |
|
Blikfeldt Agari |
مستعمرات کوچک صاف یا خشن |
|
|
محیط زیست آب گوجه فرنگی نامیده می شود | ||
|
کلم آگار |
مستعمرات توسط یک منطقه شفاف احاطه شده اند |
|
|
باکتریهای اسید لاکتیک از جنس |
Rogosa و MRS agari- |
مستعمرات بی رنگ با قطر |
|
لاکتوباسیلوس یا میکروب لاکتیک |
به نام |
1 تا 3 میلی متر عدس یا به شکل ستاره |
|
موجودات زنده |
بدون شکل |
|
|
مایع Rogosa و MRS |
کدورت |
|
|
باکتریهای اسید لاکتیک از جنس |
آگار مغذی با |
کلونی ها دارای محدب ، گرد ، مخاط هستند |
|
ساکارز |
سبک وقتی کلنی ها با سوزن یا حلقه باکتریولوژیکی برداشته می شوند ، الیاف مخاطی تشخیص داده می شوند |
|
|
باکتریهای اسید لاکتیک از جنس |
S. lactis مستعمرات سفید ، گچ- |
|
|
گروه استرپتوکوک N |
دور ، در اطراف مستعمرات ممکن است مناطقی از روشنگری وجود داشته باشد مستعمرات S. cremoris کوچک ، زرد ، بیضوی |
|
|
باکتریهای اسید لاکتیک از جنس |
چهارشنبه Briggs در مد |
مستعمرات کوچک ، صاف یا خشن هستند |
|
شارپ شارپ | ||
|
گونه های استرپتوکوک لاکتیک |
مستعمرات زرد ، گرد یا بیضی هستند |
|
|
مشترک ، که در اطراف آن مناطق روشنگری مشاهده می شود |
ضمیمه 3 پیشینه
نمونه محاسبه بيشترين تعداد باكتري هاي اسيد لاكتيك
روش تقسیمات EXTREME
رقیق های گرفته شده ................. 1: 10 1: 100 1: 1000 1: 10000
تعداد لوله\u200cهای دارای فرهنگ .......... 2 2 2 2
تعداد لوله\u200cهای دارای شیر پنیر. 2 2 1 1
یک ویژگی عددی را بنویسید. از سه عدد تشکیل شده است که تعداد لوله های شیر خرد شده خرد شده را در سه رقت آخر نشان می دهد. رقم اول (سمت چپ) از ویژگی عددی 2 است (2 لبه رقیق 1: 100 پیچ خورده است) ، دومین 1 و 3 سوم 1 است.
بنابراین ، ویژگی عددی 211 خواهد بود. این جدول مطابقت دارد. 2 به شماره 13.0. این عدد را باید با رقیق شدن که اولین رقم از ویژگی عددی را آغاز کرد ضرب کنید (به عنوان مثال ، این رقت 1: 100 است).
بنابراین ، در 1 سانتی متر 3 حاوی 1300 باکتری اسید لاکتیک (13.0x100 \u003d 1300).
|
رقیق های گرفته شده ................. | ||||
|
تعداد لوله های آزمایش شده با محصولات زراعی .......... | ||||
|
تعداد لوله\u200cهای شیر منعقد شده. | ||||
|
استرپتوکوکهایی که در میکروسکوپی یافت می شوند | ||||
|
آماده سازی kih از رقت های زیر ......... | ||||
|
باسیلهای اسید لاکتیک موجود در | ||||
|
آماده سازی روسکوپی رقیق های زیر | ||||
|
ویژگی عددی برابر است با: استرپتوکوکی. . | ||||
|
تعداد احتمالی میکروبها برای استرپتوکوکها برابر است. | ||||
|
بابا ........................... |
با تکثیر با پرورش ، تعداد استرپتوکوک ها را در 1 سانتی متر 3 - 7000 ، میله ها - 250 می گیریم.
اطلاعات اطلاعات
1. توسعه یافته و معرفی شده توسط دولت کشاورزی کشاورزی اتحاد جماهیر شوروی
2. تصویب و اجرا شده توسط مصوبه کمیته دولتی اتحاد جماهیر شوروی برای کیفیت محصول و مدیریت استاندارد از 28 نوامبر 89 شماره 3502
3. جایگزین GOST 10444.11-75
4- اسناد مربوط به فن آوري تكميل كننده
|
تعیین اسناد فنی که مرجع در آن داده می شود |
شماره مورد |
|
GOST 5541-2002 | |
|
GOST 6672-75 | |
|
GOST 8756.18-70 | |
|
GOST 9225-84 |
1.1, 2, 4.2.1, 4.2.2, 5.2.1, 5.2.2 |
|
GOST 9284-75 | |
|
GOST 10444.1-84 |
2, 3.1.2, 3.1.10, 3.2.1, 3.2.4, 3.2.5, 3.2.8, 3.2.9, 3.2.14, 3.2.16 |
|
GOST 10970-87 | |
|
GOST 13264-88 | |
|
GOST 20015-88 | |
|
GOST 24104-88 | |
|
GOST 25706-83 | |
|
GOST 26668-85 | |
|
GOST 26669-85 |
1.1, 1.2, 3.1.6, 3.1.7 |
|
GOST 26670-91 |
3.1.8, 4.1.2, 5.1.6 |
|
GOST 30425-97 |
4.1.5 ، 4.1.8.1 ، 4.1.8.3 ، 5.1.5 ، پیوست 1 |
5- مدت اعتبار طبق پروتکل شماره 5-94 شورای بین المللی استاندارد ، اندازه گیری و صدور گواهینامه برداشته شده است (NUS 11-12-94)
6. اعلامیه. آوریل 2010
4.1.5 ، 4.1.8.1 ، 4.1.8.3 ، 5.1.5 ، پیوست 1
5- مدت اعتبار طبق پروتکل N 5-94 شورای بین المللی استاندارد ، اندازه گیری و صدور گواهینامه برداشته شده است (IMS 11-12-94)
6. اعلامیه. آوریل 2010
این استاندارد در مورد محصولات غذایی و شیرهای تخمیر شده ، کشتهای استارت ، کنسانتره باکتریها و آماده سازی باکتریایی باکتریهای اسید لاکتیک کاربرد دارد و روشی را برای تعیین میکروارگانیسمهای اسید لاکتیک زنده و تعداد احتمالی آنها (VLF) و همچنین روشهای تعیین در محصولات غذایی (به جز فرآورده های شیر تخمیر شده ، کشتهای استارت ، کنسانترههای باکتریایی) تعیین می کند. و آماده سازی باکتریایی باکتریهای اسید لاکتیک) باکتریهای جنس Lactobacillus ، Leuconostoc ، گروه استرپتوکوکی N از جنس Streptococcus ، Pediococcus ، S. thermophilus و تعیین شده محتمل ترین تعداد (LPC) باکتری های جنس Lactobacillus است.
این روش بر اساس بذر مقدار معینی از محصول و (یا) رقیق شدن آن در مواد مغذی انتخابی مایع یا آگارزه شده ، کشت محصولات زراعی در شرایط بهینه و در صورت لزوم تعیین خصوصیات مورفولوژیکی و بیوشیمیایی میکروارگانیسم های تشخیص داده شده و محاسبه آنها است.
این روش برای:
ایجاد انطباق شاخص های کیفیت میکروبیولوژیکی مواد غذایی و لبنیات ، کشت استارت ، کنسانتره باکتریها و آماده سازی باکتریایی باکتریهای اسید لاکتیک با الزامات مستندات اصولی و فنی.
ایجاد استریل صنعتی مواد غذایی کنسرو ؛
پیدا کردن دلایل نقایص مواد غذایی.
1. انتخاب و آماده سازی نمونه ها
1.1. براساس GOST 26668 ، GOST 26669 ، نمونه گیری و تهیه نمونه های مواد غذایی به جز لبنیات.
نمونه برداری از فرآورده های شیر تخمیر شده (خشک و مایع) ، کشت استارت ، کنسانتره باکتری و آماده سازی باکتریایی باکتری های اسید لاکتیک و تهیه آنها برای تجزیه و تحلیل - مطابق با GOST 9225 *.
________________
GOST R 53430-2009.
1.2 مواد غذایی کنسرو شده برای نشت - براساس GOST 8756.18 - بررسی می شود.
مواد نگهدارنده كامل ، از نظر ظاهري طبيعي ، قبل از آزمايش در دماي 30-37 درجه سانتيگراد در ظروف با ظرفيت حداكثر 1 dm شامل حداقل براي 5 روز و در ظروف با ظرفيت بيش از 1 dm - حداقل 7 روز مورد استفاده قرار مي گيرد.
محصولات غذایی که در آن تعداد میکروارگانیسم های اسید لاکتیک عادی شده است ، تحت کنترل دما نیستند.
رقیق محصولات براساس محلول پپتون نمکی طبق GOST 26669 تهیه می شود.
رقت های اولیه محصولات با کسری انبوه NaCl بیش از 5٪ با استفاده از آب پپتون تهیه می شوند. رقت های اولیه ماهی و فرآورده های گوشتی با استفاده از نمکی فیزیولوژیکی تهیه می شود.
برای آزمایش ، تجهیزات ، مواد ، مواد معرف مطابق با GOST 10444.1 ، GOST 9225 و موارد زیر استفاده می شود:
GOST 24104 * ، با حداکثر وزن حداکثر تا 200 گرم و خطای 2 میلی گرم ± (برای معرفهای توزین)؛
________________
GOST 24104-2001 GOST R 53228-2008.
مقیاسهای آزمایشگاهی با هدف کلی با خصوصیات اندازه گیری مطابق با GOST 24104 * ، با حداکثر وزن حداکثر تا 200 گرم و حاشیه خطا 15 میلی گرم ((برای وزن گیری محصول).
________________
* از اول ژوئیه 2002 ، GOST 24104-2001 معرفی شد. GOST R 53228-2008 در قلمرو فدراسیون روسیه معتبر است.
میکروسکوپ نوری بیولوژیکی با دستگاهی برای میکروسکوپ کنتراست فاز یا مارک های مشابه دیگر.
پوشش های داخلی مطابق با GOST 6672؛
عینک موضوع مطابق با GOST 9284؛
ترموستات با طیف وسیعی از دمای کار از 28-55 درجه سانتیگراد ، که اجازه می دهد درجه حرارت تنظیم شده با دقت 1 درجه سانتیگراد حفظ شود.
برش پنبه مطابق با GOST 5541
ذره بین تاشو جیب ، افزایش 4-10 بار مطابق با GOST 25706؛
پانکراتین برای آماده سازی باکتریایی و ویروسی.
کلروفرم فنی مطابق با GOST 20015؛
شیر کم چربی با اسیدیته بیشتر از 19 درجه سانتیگراد ، حاصل از شیر گاو که حداقل درجه 2 مطابق با GOST 13264 * تهیه شده است ، یا پودر شیر تهیه شده مطابق با GOST 10970 **؛
________________
* GOST R 52054-2003 در قلمرو فدراسیون روسیه معتبر است.
** در قلمرو فدراسیون روسیه GOST R 52791-2007 معتبر است.
هیدروکلراید ال-آرژنین؛
بنزیدین اساسی یا اسید هیدروکلریک؛
سیترات پتاسیم؛
کربوکسیل متیل سلولز؛
بین 80؛
استات سدیم؛
سیترات آمونیوم؛
سولفات منیزیم (MgSO7HO)؛
سولفات منگنز (MnSO2HO)؛
سولفات منگنز (MnSO4HO)؛
اسید سوربیک؛
نیگروسین؛
فنل
3.1 تهیه محلول های معرفها و نشانگرها برای آزمایش محصولات غذایی (بجز محصولات شیر \u200b\u200bتخمیر شده ، کشتهای استارت ، کنسانتره باکتریها و آماده سازی باکتریایی باکتریهای اسید لاکتیک)
3.1.1. نشانگر بنفش بروموکرزول ، محلول با غلظت جرم 1 گرم در روز: 1/0 گرم بنفش برموکروزول ، با رعایت قوانین آسپتیک ، منتقل می شود ، با شستشو با آب مقطر استریل ، داخل ظرف های حجمی با ظرفیت 100 سانتی متر ، حجم را با همان آب به علامت می گذارد. محلول بیش از 3 ماه در دمای اتاق نگهداری نمی شود.
3.1.2. کربنات کلسیم ، سیستم تعلیق آبی با غلظت جرم 30 گرم در روز: 3 گرم کربنات کلسیم ، استریل شده با توجه به GOST 10444.1 ، منتقل می شود ، با آب شستشو ، با آب مقطر ، به ظرف های حجمی با ظرفیت 100 سانتی متر منتقل می شود ، حجم آن را به علامت می آورند. سیستم تعلیق در دمای (1 12 121) درجه سانتیگراد به مدت 20 دقیقه استریل می شود. سیستم تعلیق بیش از 3 ماه در دمای اتاق نگهداری نمی شود.
3.1.3. کربولفوکسین ، محلول غلیظ: 1 گرم فوکسین با 10 سانتی متر 96٪ اتانول و 100 سانتی متر محلول فنل با غلظت جرم 50 گرم در روز است.
برای تهیه محلول کار کربولفوکسین ، آب مقطر 90 سانتی متر به 10 سانتی متر از محلول غلیظ کاربولفوکسین اضافه می شود.
3.1.4. محلول بنفش کریستالی با غلظت جرم 10 گرم در روز: 1 گرم بنفشه کریستالی با شستشو با آب مقطر ، به یک ظرف اندازه گیری با ظرفیت 100 سانتی متر منتقل می شود ، حجم آن با علامت تنظیم می شود. محلول بیش از 3 ماه در دمای اتاق نگهداری نمی شود.
3.1.5. سیستم تعلیق نیگروسین با غلظت 100 گرم در روز: 10 گرم نیگروسین ، با شستشو با آب مقطر ، به یک ظرف اندازه گیری با ظرفیت 100 سانتی متر منتقل می شود ، حجم آن به یک علامت آورده می شود ، تا دمای 45-50 درجه سانتیگراد در یک حمام آب گرم می شود و سپس از طریق فیلتر پنبه ای گاز فیلتر می شود.
3.1.6. محلول پپتون نمکی مطابق با GOST 26669 تهیه می شود.
3.1.7. آب پپتون مطابق با GOST 26669 تهیه می شود.
3.1.8. اسید سوربیک ، محلول قلیایی: 1 گرم اسید سوربیک منتقل می شود ، شستشو با محلول هیدروکسید سدیم NaOH \u003d 1 mol / dm ، در اندازه گیری ظروف با ظرفیت 100 سانتی متر ، حجم با همان محلول به علامت تنظیم می شود. محلول حاصل با استفاده از فیلتراسیون غشایی مطابق با GOST 26670 استریل می شود.
مجاز به تهیه محلول اسید سوربیک بدون فیلتر با رعایت قوانین آسپتیک است ، در حالی که محلول هیدروکسید سدیم در آب مقطر استریل تهیه می شود.
3.1.9. معرف برای تعیین سیتوکروم ها: 1 گرم بنزیدین پایه یا هیدروکلریک اسید در 20 سانتی متر از 99.8٪ اسید استیک یخبندان حل می شود ، 30 سانتی متر آب مقطر اضافه می شود و به آرامی گرم می شود ، پس از خنک شدن ، 50 سانتی متر 96٪ اتانول به محلول اضافه می شود. محلول به مدت 1 ماه در یخچال نگهداری می شود.
3.1.10. محلول نمکی مطابق با GOST 10444.1 تهیه می شود.
3.2 تهیه مواد مغذی برای آزمایش مواد غذایی (بجز محصولات شیر \u200b\u200bتخمیر شده ، کشتهای استارت ، کنسانتره باکتریها و آماده سازی باکتریایی باکتریهای اسید لاکتیک)
3.2.1. محیط متراکم Blikfeldt مطابق با GOST 10444.1 تهیه شده است.
3.2.2. محیط Blikfeldt مایع است: 10 گرم لاکتوز ، 10 گرم گلوکز ، 5 گرم پپتون در 950 سانتی متر آب مقطر حل شده ، جوش داده می شود و از طریق فیلتر کاغذی فیلتر می شود. 20 سانتی متر عصاره مخمر ، 32 سانتی متر محلول بنفش بروموکروزول مطابق بند 3.1.1 به صافی اضافه می شود ، pH به 0.1 7. 7.3 تنظیم می شود ، درون لوله های استریل ریخته می شود و در دمای (1 11 117) درجه سانتیگراد به مدت 20 دقیقه تنظیم می شود.
3.2.3. چهارشنبه Briggs ، اصلاحات شارپ:
15 گرم پپتون ، 20 گرم گلوکز ، 25 سانتیمتر عصاره مخمر ، 5 گرم اسید استیک سدیم ، 5 گرم فسفات پتاسیم مونواسید شده ، 2 گرم سیترات آمونیوم ، 100 سانتی متر آب گوجه فرنگی به 875 سانتی متر آب مقطر اضافه می شود (با فرض اینکه آب حاوی آن نباشد کمتر از مواد جامد محلول در 4.5٪ ، در صورتی که آب گوجه فرنگی حاوی مقدار مختلفی از مواد جامد باشد ، مقدار مواد جامد 4.5٪ را دوباره محاسبه کنید) ، 1 سانتی متر از محلول Tween-80 ، 5 سانتی متر محلول نمکی (MgSO · 7NO - 11.5 g ، MnSO 4HO - 2.86 گرم ، FeSO 7HO - 0.68 گرم ، آب مقطر تا 100 سانتی متر) ، 15 گرم آگار.
این مخلوط را روی حرارت کم جوشانده تا وقتی که آگار کاملاً حل شود. pH را طوری تنظیم کنید که پس از عقیم سازی در دمای 25 درجه سانتیگراد قرار گیرد (1/6 6. 6/6). این ماده در دمای 1 115 115 درجه سانتیگراد به مدت 15 دقیقه استریل می شود.
3.2.4 محیط مخمر: در 100 سانتی متر عصاره مخمر تهیه شده مطابق با GOST 10444.1 ، 900 سانتی متر آب مقطر ، 10 گرم کربنات کلسیم را مطابق با GOST 10444.1 و 100 گرم ساکارز اضافه کنید. این مخلوط تا زمانی که ساکارز حل شود گرم می شود ، pH تنظیم می شود به طوری که پس از استریلیزاسیون در دمای 25 درجه سانتیگراد (1/1 7 7/7) قرار می گیرد ، درون لوله های 10 سانتی متری ریخته می شود و در دمای (1 12 121) درجه سانتیگراد برای 15 می شود. دقیقه
3.2.5. آگار کلم مطابق با GOST 10444.1 تهیه می شود.
3.2.6. مایع MRS: 10 گرم پپتون ، 20 سانتی متر عصاره مخمر ، 20.0 گرم گلوکز ، 1.0 سانتی متر از tween-80 ، 2.0 گرم فسفات پتاسیم رفع شده ، 5.0 گرم استات سدیم در یک فلاسک حجمی با ظرفیت 1.0 dm قرار می گیرد ، 2.0 گرم سیترات تریامونیوم ، 0.2 گرم سولفات منیزیم ، 0.05 گرم سولفات منگنز (MnSO4HO) ، آب گوشت را به آن اضافه کنید. قطعات را با گرم کردن در حمام آب حل کرده و pH را تنظیم کنید تا پس از عقیم سازی در دمای 25 درجه سانتیگراد قرار گیرد (1/6 6 6.2). این ماده 10 سانتی متر درون لوله های استریل ریخته می شود و در دمای (1 12 121) درجه سانتیگراد به مدت 15 دقیقه اتوکلاو می شود. لوله های آزمایش شده با یک ماده مغذی در دمای (1 4 4) ° С به مدت بیش از 30 روز ذخیره نمی شوند.
3.2.7 محیط MPC Agarized مطابق دستور العمل مشخص شده در بند 3.2.6 با افزودن 15-18 گرم آگار تهیه می شود. پس از حل شدن اجزاء ، محیط را درون گلدانهای استریل ریخته و در اتوکلاو در دمای (1 12 121) درجه سانتیگراد به مدت 15 دقیقه استریل می کنیم. محیط نهایی به مدت بیش از 30 روز در دمای (1 4 4) درجه سانتیگراد نگهداری می شود.
در صورت لزوم ، برای افزایش انتخاب ، پس از عقیم سازی ، 1 سانتی متر از محلول قلیایی اسید سوربیک طبق بند 3.1.8 به 1 dm از محیط آگار یا مایع اضافه می شود.
3.2.8. چهارشنبه آبگوشت گوشت پپتون با pH برابر 9/9:
در گوشت و مایع پپتون که مطابق با GOST 10444.1 تهیه شده است ، pH با استفاده از محلولهای قلیایی و اسید مطابق با GOST 10444.1 تنظیم می شود به طوری که پس از عقیم سازی ، 9.6 در 25 درجه سانتیگراد است. این ماده به مدت 20 دقیقه در دمای (1 ° 121) درجه سانتیگراد استریل می شود.
3.2.9. آبگوشت پپتون گوشتی با میزان کلرید سدیم 6.5٪ مطابق با GOST 10444.1 تهیه می شود ، اما در هنگام پخت و پز ، مقدار کلرید سدیم اضافه شده به 65 گرم در هر دسی متر متوسط \u200b\u200bافزایش می یابد.
3.2.10 مواد مغذی آگار با ساکارز:
100.0 گرم ساکارز ، 15.0 گرم آگار به 1 روز از مایع گوشتی پپتون اضافه می شود و به طور دوره ای هم زده می شود ، این مخلوط تا جوش و انحلال کامل همه اجزا گرم می شود.
محیط تا 45-55 درجه سانتیگراد سرد می شود و pH تنظیم می شود به طوری که پس از عقیم سازی در دمای 25 درجه سانتیگراد (0.1 7 7.1) قرار می گیرد.
محیط را درون گلدان ها ریخته و به مدت 15 دقیقه در دمای (1 12 121) درجه سانتیگراد استریل می شود. پس از استریلیزاسیون و بررسی pH ، محیط به خوبی مخلوط می شود و در ظروف پتری ریخته می شود و در دمای (1 4 4) درجه سانتیگراد بیش از 14 روز نگهداری می شود.
3.2.11 ردی متوسط: پایه متوسط \u200b\u200b- 15.0 گرم آگار به یک فلاسک حاوی 500 سانتی متر آب مقطر اضافه می شود و در حمام آب گرم می شود تا وقتی که آگار حل شود. در یک فلاسک دیگر حاوی 500 سانتی متر آب مقطر ، 10.0 گرم سیترات پتاسیم و 15.0 گرم کربوکسیل متیل سلولز اضافه شده و با گرم شدن حل می شود. محتویات هر دو فلاسک مخلوط شده و 3.0 گرم پپتون ، 25 سانتی متر عصاره مخمر ، 1.25 گرم فسفات پتاسیم رفع شده ، 5.0 گرم هیدروکلراید L-arginine اضافه می شود ، در حمام آب گرم می شود تا زمانی که اجزای کاملاً حل شوند ، تا دمای 45-55 درجه سرد شوند C را تنظیم کرده و pH را طوری تنظیم کنید که پس از عقیم سازی در دمای 25 درجه سانتیگراد (0.2 6. 6.3) قرار گیرد. اساس این ماده در دمای (1 12 121 درجه سانتیگراد) به مدت 15 دقیقه استریل می شود و در دمای (1 4 4) درجه سانتیگراد برای بیش از 30 روز ذخیره می شود.
برای تهیه ماده غذایی مغذی ، 5.0 سانتی متر شیر استریل استریل ، 100 سانتیمتر تعلیق کربنات کلسیم با غلظت جرم 30 گرم در روز و 2 سانتی متر محلول محلول بنفش بروموکرزول با غلظت جرم 1 گرم در روز به 1 dm از مذاب اضافه می شود و تا پایه 45-55 درجه سانتیگراد سرد می شود.
3.2.12 محیط روگوز مایع است: 10.0 گرم پپتون ، 25.0 سانتی متر عصاره مخمر ، 20.0 گرم گلوکز ، 1.0 سانتی متر از tween-80 ، 6.0 گرم فسفات پتاسیم ، مونوژن شده ، 2 ، در یک فلاسک حجمی با ظرفیت 1.0 dm ، 2 ، قرار داده می شود. 0 گرم سیترات آمونیوم ، 25.0 گرم استات سدیم ، 1.32 سانتی متر اسید استیک یخچال ، 0.575 گرم سولفات منیزیم ، 0.12 گرم سولفات منگنز (MnSO2HO) ، 0.034 گرم سولفات آهن ، آب مقطر به مارک اضافه می شود ، اجزاء حل می شوند در حمام آب گرم کنید و pH را تنظیم کنید تا پس از عقیم سازی در دمای 25 درجه سانتیگراد قرار گیرد (1 ± 4/5). این ماده 10 سانتی متر درون لوله های استریل ریخته می شود و در دمای (1 12 121) درجه سانتیگراد به مدت 15 دقیقه اتوکلاو می شود. لوله های آزمایش شده با یک ماده مغذی در دمای (1 4 4) ° С به مدت بیش از 30 روز ذخیره نمی شوند.
3.2.13. محیط Agaric Rogosa مطابق دستور العمل گفته شده در بخش 3.2.12 و با افزودن 20.0 گرم آگار تهیه می شود. پس از حل شدن اجزا ، محیط را درون گلدانهای استریل ریخته و در اتوکلاو در دمای (1 12 121) درجه سانتیگراد به مدت 15 دقیقه ریخته می شود. محیط نهایی به مدت بیش از 30 روز در دمای (1 4 4) درجه سانتیگراد نگهداری می شود.
3.2.14. محیط حاصل از آب گوجه فرنگی مطابق با GOST 10444.1 تهیه شده است.
3.2.15. متوسط \u200b\u200bبرای تعیین pseudocatalase: 5.0 * پپتون ، 25 سانتی متر عصاره مخمر ، 0.5 سانتی متر از Tween-80 ، 0.1 گرم (MnSO4HO) ، 0.5 گرم گلوکز ، 15 گرم آگار در یک فلاسک حجمی 1 dm قرار داده می شود آبگوشت-پپتون گوشت را به علامت اضافه کنید ، اجزاء را با گرم کردن در حمام آب حل کنید و pH را تنظیم کنید تا پس از عقیم سازی در دمای 25 درجه سانتیگراد باشد (1/6 6. 9/6). این ماده را درون لوله های آزمایش 5-7 سانتی متر ریخته و در اتوکلاو در دمای (1 12 121) درجه سانتیگراد به مدت 15 دقیقه ریخته می شود. پس از عقیم سازی ، لوله ها روی سطح متمایل قرار می گیرند تا از جمب ها بدست آیند.
________________
* متن سند با اصل مطابقت دارد. - یادداشت توسط سازنده بانک اطلاعات.
3.2.16. چهارشنبه لی:
اساس متوسط \u200b\u200b- 10.0 گرم پپتون ، 50 سانتی متر عصاره مخمر ، 5.0 گرم لاکتوز ، 3.0 گرم کربنات کلسیم با استریل طبق GOST 10444.1 ، 0.5 گرم NaHPO ، 18 گرم آگار به یک فلاسک حجمی 1-dm اضافه می شود ، آب مقطر را به علامت زده ، اجزاء را با گرم کردن در حمام آب حل کرده و pH را تنظیم کنید تا پس از عقیم سازی در دمای 25 درجه سانتیگراد قرار گیرد (1 7 7.0). این ماده در اتوکلاو در دمای (1 12 121) درجه سانتیگراد به مدت 20 دقیقه استریل می شود و در صورت لزوم در دمای (1 4 4) درجه سانتیگراد بیش از 30 روز ذخیره می شود.
برای تهیه ماده غذایی مغذی ، به 1 dm از پایه ، 20 سانتی متر از محلول استریل از برموکروزول بنفش با غلظت جرم 1 گرم در روز ، اضافه کنید و مخلوط کرده و داخل ظرف های پتری بریزید. این ماده در دمای (1 4 4) درجه سانتیگراد بیش از 7 روز ذخیره می شود.
3.3 تهیه محیط کشت برای آزمایش فرآورده های شیر تخمیر شده ، کشت های اولیه ، کنسانتره باکتری ها و آماده سازی باکتریایی باکتری های اسید لاکتیک
3.3.1. تهیه شیر هیدرولیز
شیر بدون چربی طبیعی یا بازسازی شده به مدت 20 دقیقه با جوشان بخار شده درمان می شود و تا دمای (2 45 45) درجه سانتیگراد سرد می شود. اسیدیته فعال با افزودن محلول آبی با کسری جرم NaOH 40٪ به pH (1/1 7. 7/7) تنظیم می شود. 0.5 تا 1.0 گرم پودر پانکراتین به 1000 سانتی متر شیر اضافه می شود. سپس 5 تا 6 سانتی متر کلروفرم به شیر اضافه می شود. فلاسک با یک درپوش چوب پنبه بسته می شود و در دمای (2 40 40) درجه سانتیگراد به مدت 18-24 ساعت نگه داشته می شود در طی 3-5 ساعت اول شیر 2-3 بار مخلوط می شود (پس از همزن برای جلوگیری از حذف کلروفرم ، بازکن باز می شود).
سپس شیر هیدرولیز شده از طریق فیلتر کاغذی فیلتر می شود ، با آب مقطر به نسبت 1: 1 رقیق می شود ، اسیدیته فعال pH تنظیم می شود (با 1/1 7 1/7 7) با اضافه کردن محلول آبی با کسر جرم NaOH 40٪ و برای تهیه آگار با شیر هیدرولیز تنظیم می شود. در صورت ذخیره سازی ، شیر هیدرولیز شده در اتوکلاو در دمای 1 12 121 درجه سانتیگراد به مدت 15 دقیقه استریل می شود.
3.3.2. تهیه آگار با شیر هیدرولیز شده
ترکیب:
شیر هیدرولیز ، سانتی متر | |
15 گرم آگار به 1000 سانتی متر شیر هیدرولیز اضافه می شود. این محفظه تا زمانی که آگار کاملاً ذوب و از طریق پشم پنبه فیلتر شود ، گرم می شود و درون لوله های آزمایش یا فلاسک ها ریخته می شود و در اتوکلاو در دمای (1 12 121) درجه سانتیگراد به مدت (1 10 10) دقیقه استریل می شود.
3.3.3. تهیه شیر کم چربی استریل
شیر بدون چربی طبیعی یا بازسازی شده 10 سانتی متر درون لوله ها ریخته می شود و در دمای (1 12 121) درجه سانتیگراد برای (1 10 10) دقیقه استریل می شود.
4.1 آزمایش مواد غذایی (به استثنای فرآورده های شیر تخمیر شده ، کشت های استارت ، کنسانتره باکتری ها و آماده سازی باکتریایی باکتری های اسید لاکتیک)
4.1.1. برای تعیین میکروارگانیسم ها با استفاده از یک نمونه آماده از محصول یا رقیق شدن اولیه آن.
برای تعیین حضور و شمارش تعداد میکروارگانیسم های موجود در ظروف پتری از یک نمونه از محصول غذایی یا از رقت اولیه ، تعدادی رقیق سازی مطابق با تعداد مجاز میکروارگانیسم های موجود در مستندات نظارتی و فنی برای نوع خاصی از محصول غذایی تهیه می شود.
برای محاسبه LDP از نمونه محصول غذایی ، یک سری اولیه و یک سری رقت ده برابر تهیه می شود تا میکروارگانیسم ها در محصولات بالاترین رقت شناسایی نشوند. برای کاشت حداقل سه رقیق متوالی انتخاب می شوند. از هر رقیق سه لوله موازی بذر می شود.
4.1.2. 1.0 سانتی متر از نمونه محصول آماده شده و (یا) رقیق سازی آن با استفاده از روش عمیق برای تلقیح در محیط های مایع با استفاده از روش UHF و روی ظروف پتری صورت می گیرد ؛ هر یک از آنها 1/0 تا 2 سانتی متر برای تلقیح روی ظروف پتری با روش سطح انجام می شود.
محصولات زراعی با روش های عمیق یا سطح و همچنین با استفاده از فیلتراسیون غشایی ، مطابق با GOST 26670 انجام می شود.
هنگام استفاده از روش فیلترهای غشایی ، حجم یک محصول مایع را فیلتر کنید ، که در مستندات هنجاری و فنی برای یک نوع خاص از محصول غذایی ذکر شده است.
4.1.3. برای تعیین حضور یا تعداد میکروارگانیسم های اسید لاکتیک UHF ، کاشت در یکی از رسانه های مایع مشخص شده در بندهای 3.2.2 ، 3.2.6 یا 3.2.12 انجام می شود.
اگر پس از افزودن محصول به محیط Blikfeldt ، محیط تغییر رنگ دهد ، چند قطره از محلول قلیایی استریل (NaOH یا KOH) با غلظت جرم 50 گرم در dm اضافه می شود تا رنگ اولیه بازیابی شود.
برای تعیین حضور یا تعداد تعداد میکروارگانیسم های اسید لاکتیک ، مجاز است به جای تلقیح کردن در یکی از رسانه های آگرای شده مشخص شده در بندهای 3.2.1 ، 3.2.5 ، 3.2.7 ، 3.2.13 یا 3.2.14 ، تلقیح شده را در محیط مایع انجام دهید.
برای تعیین وجود یا شمارش باکتریهای LF از جنس Lactobacillus ، کاشت در یکی از رسانه های مایع مشخص شده در بندهای 3.2.6 یا 3.2.12 انجام می شود.
برای تعیین وجود یا تعداد تعداد باکتری های جنس Lactobacillus ، بجای کاشت در محیط مایع ، کاشت با استفاده از روش عمیق در یکی از محیط های کشت شده مشخص شده در بندهای 3.2.7 یا 3.2.13 انجام می شود.
برای تعیین وجود باکتری های جنس Leuconostoc ، کاشت در محیط مایع مشخص شده در بند 3.2.4 انجام می شود.
به منظور تعیین حضور به جای استفاده از یک مایع مایع ، و همچنین شمارش تعداد باکتری های جنس Leuconostoc در ظروف پتری یا با استفاده از روش فیلتراسیون غشایی ، سطح آن روی یک محیط آگار مشخص می شود که در بند 3.2.10 مشخص شده است.
برای تعیین حضور یا محاسبه تعداد استرپتوکوکهای گروه N استرپتوکوک N ، از کاشت استرپتوکوک با روش عمیق در محیط آگار مشخص شده در بند 3.2.11 استفاده می شود و برای S.thermophilus از محیط مطابق بند 3.2.16 استفاده می شود.
برای تعیین وجود یا تعداد تعداد باکتری های جنس Pediococcus ، تلقیح شده در محیط آگار مشخص شده در بند 3.2.3 تلقیح می شود.
4.1.4. محصولات زراعی برای تعیین حضور یا تعداد تعداد میکروارگانیسم های اسید لاکتیک ، باکتری جنس Lactobacillus streptococci از گروه N جنس Streptococcus به مدت بیش از 5 روز در دمای (1 30 30) درجه سانتیگراد یا بیش از 3 روز در دمای (1 37 37) درجه سانتی گراد انکوبه می شوند. محصولات زراعی برای تعیین حضور یا تعداد تعداد باکتری های جنس Leuconostoc به مدت بیش از 5 روز در دمای (1 22 22) درجه سانتیگراد انکوبه می شوند. محصولات زراعی برای تعیین حضور یا تعداد S.thermophilus (3 48 48) ساعت در دمای (1 45 45) درجه سانتی گراد انکوبه می شوند. محصولات زراعی روی ظروف پتری برای جوجه کشی در حضور یا تعداد باکتری های جنس Leuconostoc ، وارونه می شود.
جوجه کشی محصولات زراعی در محیط مایع متوقف می شود که علائم قابل توجهی از رشد وجود داشته باشد.
شمارش مقدماتی مستعمرات در رسانه های آگار پس از 48 ساعت انجام می شود
4.1.5. در محصولات زراعی روی محاصره شده برای تعیین میزان یا تعداد تعداد میکروارگانیسم های اسید لاکتیک ، باکتری های جنس Lactobacillus ، گروه Pediococcus streptococcus N از جنس Streptococcus ، S.thermophilus ، محدودیت دسترسی مطابق با GOST 30425 یا یکی از روشهای زیر انجام می شود:
بر روی مواد مغذی جامد شده در ظروف پتری ، یک لایه دوم از مواد آهک مذاب شده و خنک شده تا (1 45 45 درجه سانتیگراد) درجه حرارت آگار به مقدار 5.0 سانتی متر ریخته و برای سفت شدن باقی می ماند.
ظروف پتری در محیط گازی متشکل از 95٪ N و 5٪ CO قرار می گیرد.
ظروف پتری در بی هوازی قرار می گیرد. دستگاه بسته است ، با استفاده از پمپ خلاء خلاء 86.6-93.3 kPa ایجاد می شود.
پارافین مایع استریل با یک ماده مایع به مقدار لازم برای بدست آوردن ستونی در حدود 2 سانتی متر به هر لوله اضافه می شود.
4.1.6. محصولات زراعی روی رسانه های مایع روزانه لوله های اسکن شده و منتخب با علائم قابل توجهی از رشد می شوند. ماهیت رشد در رسانه های مایع در پیوست 2 آورده شده است. از لوله هایی که علائم رشد دارند ، روی رسانه های آگارزه شده تحقیق شده است (بند 4.1.3 را ببینید) با یک حلقه باکتریولوژیکی انجام می شود تا رشد کلنی های جدا شده بدست آید. محصولات زراعی طبق بند 4.1.4 جوجه کشی می شوند.
4.1.7. محصولات زراعی روی محاصره شده پس از انکوباسیون بررسی شده و ظروف پتری برای شمارش انتخاب می شوند که از این تعداد 15 تا 150 کلنی مشخصه رشد کرده اند.
هنگام تعیین تعداد میکروارگانیسم ها به روش فیلترهای غشایی ، مجاز به انتخاب تعداد ظروف پتری برای شمارش است اگر کمتر از 15 کلنی مشخصه روی فیلترها رشد کرده باشند.
خصوصیات مستعمرات مشخصه در پیوست 2 آورده شده است.
4.1.8. برای تأیید این که مستعمرات مشخصه متعلق به میکروارگانیسم های لاکتیک یا باکتری های یکی از جنس های Lactobacillus ، Leuconostoc ، Pediococcus streptococci از گروه N جنس Streptococcus ، S.thermophilus است ، حداقل 5 کلونی مشخصه مطابق با 4.1.7 یا 4.1.6 از محصولات زراعی انتخاب می شوند. وابستگی هر کلونی منتخب به میکروارگانیسم های خاص در رابطه با لکه های گرم ، تحرک و وجود کاتالاز برقرار می شود ؛ علاوه بر این ، در هنگام شناسایی باکتری های جنس Leuconostos ، وجود کپسول ها مشخص می شود ؛ در هنگام شناسایی استرپتوکوک گونه های S.thermophilus و استرپتوکوکی از گروه N جنس استرپتوکوک رشد pH 9.6 و در مایع گوشت و پپتون با 6.5٪ سدیم کلسیم.
4.1.8.1. برای تعیین نسبت میکروارگانیسم ها به لکه های گرم ، از کلنی ها اسمیر تهیه می شود که مطابق با GOST 30425 و میکروسکوپی رنگ آمیزی می شوند.
4.1.8.2. برای مطالعه تحرک میکروارگانیسم ها ، مستعمرات از طریق کلنی ها به روش قطره آویزان یا خرد شده و میکروسکوپی تهیه می شوند. نتایج میکروسکوپی مطابق با پیوست 1 ارزیابی می شود.
4.1.8.3. فعالیت کاتالاز فرهنگها مطابق با GOST 30425 تعیین می شود.
نتایج تعیین فعالیت کاتالاز مطابق با پیوست 1 ارزیابی می شود.
تجزیه پراکسید هیدروژن در باکتری های جنس Pediococcus به دلیل آنزیم pseudocatalase امکان پذیر است. بنابراین ، هنگام تعیین میکروارگانیسم های لاکتیک یا باکتری های جنس Pediococcus ، اگر میکروارگانیسم های گرم مثبت و بدون تحرک که واکنش کاتالیز مثبت دارند در کلنی های مشخصه تشخیص داده می شوند ، عدم وجود سیتوکروم ها با تنظیم آزمایش بنزیدین کنترل می شود. برای این کار ، کلونی های باکتریایی 24-48 ساعته که روی ظروف پتری پرورش یافته اند با محلول بنزیدین مشخص شده در بند 3.1.9 ریخته می شوند. پس از اشباع محلول با کلنی ها ، تقریباً همان حجم 5٪ پراکسید هیدروژن به فنجان اضافه می شود. میکروارگانیسم های اسید لاکتیک ، از جمله باکتری های جنس Pediococcus ، فاقد سیتوکروم هستند. در حضور سیتوکرومها ، مستعمرات به رنگ آبی مایل به سبز یا آبی روشن دیده می شوند.
در صورت عدم وجود بنزیدین ، \u200b\u200bتعیین وجود pseudocatalase در محیط بند 3.2.15 با غلظت گلوکز پایین 0.05 درصد مجاز است.
محصولات زراعی طبق بند 4.1.4 انکوبه می شوند ، تعیین pseudocatalase به همان روش کاتالاز طبق GOST 30425 انجام می شود.
فرهنگهای تشکیل دهنده pseudocatalase به جنس Pediococcus تعلق دارند.
4.1.8.4. هنگام شناسایی باکتری های جنس Leuconostoc ، آماده سازی ها با توجه به Storm برای شناسایی کپسول های باکتریایی تهیه و آغشته می شوند. برای انجام این کار ، بر روی یک اسلاید شیشه ای به خوبی چرب و خزدار ، قطره یک فرهنگ باکتریایی با یک پودر ریز از لاشه سیاه یا تعلیق نیگروسین مخلوط می شود.
با استفاده از یک لیوان دیگر با لبه های صیقلی ، یک اسمیر نازک به سرعت تهیه می شود که چندین بار از طریق شعله مشعل برطرف می شود. اسمیر با محلول بنفشه کریستالی یا محلول کاربولکسین رنگ آمیزی می شود. به آرامی در یک ظرف با آب شسته شده ، در هوا بگذارید تا خشک شود و میکروسکوپ شود. مجاز به خشک کردن یک لکه بین ورق های کاغذ فیلتر نیست. پس زمینه دارو با تعلیق نازک ریمل سیاه یا نیگروسین رنگ آمیزی می شود. بدن باکتری ها به صورت تک رنگ رنگ آمیزی می شوند ، کپسول ها بدون رنگ باقی می مانند.
4.1.8.5. هنگام شناسایی استرپتوکوکهای گروه N از جنس استرپتوکوک ، استرپتوکوک گونه S.thermophilus ، عدم رشد بر روی مایع گوشتی-پپتون با pH برابر 9/9 و روی مایع گوشتی پپتون با میزان کلرید سدیم 6.5 درصد تعیین شد.
برای این محصول ، طبق 4.1.8 ، بر روی رسانه های مندرج در بندهای 3.2.8 و 3.2.9 کشت داده می شود.
محصولات زراعی در دمای (1 30 30) درجه سانتیگراد به مدت 3 روز انکوبه می شوند ، و با شناسایی S.thermophilus ، محصولات زراعی در دمای 1 45 45 درجه سانتیگراد به مدت 3 روز انکوبه می شوند.
4.2. آزمایش فرآورده های شیر تخمیر شده ، کشت های اولیه ، کنسانتره باکتری ها و آماده سازی باکتریایی باکتری های اسید لاکتیک
4.2.1. تهیه رقیق کننده محصولات شیر \u200b\u200bتخمیر شده (خشک و مایع) مطابق با GOST 9225.
برای تهیه رقیق شدن کشتهای استارت ، کنسانتره های باکتریایی و آماده سازی باکتریایی باکتریهای اسید لاکتیک ، لبه های بطری و بسته بندی با الکل پاک می شوند ، لبه بطری سوخته و چوب پنبه برداشته می شود ، لبه بسته بسته شده با قیچی پروفیل شده برش داده می شود ، 1 گرم مواد تست شده در ملات استریل یا پروفیل قرار داده می شود ، با یک درب از ظرف پتری و یا استریل پوشانده می شود. کاغذ را با افزودن مقدار کمی از محلول کلرید سدیم یا بافر فسفات از یک فلاسک حاوی 99 سانتی متر محلول یا بافر کاملاً ریز خرد کنید. مواد معلق با محلول باقیمانده کلرید سدیم یا فسفات سولفات داخل فلاسک ریخته می شود و رقت دوم 1: 100 دریافت می کند.
از رقیق دوم فرآورده های شیر تخمیر شده ، کشت های استارت ، کنسانتره های باکتریایی و آماده سازی باکتریایی باکتری های اسید لاکتیک ، رقت های زیر مطابق با مقدار باکتری های اسید لاکتیک که در مستندات هنجاری و فنی ذکر شده است ، با استفاده از جدول 1 تهیه می شوند.
جدول 1
نام محصول | رقیق استفاده می شود |
نوشیدنی های شیر ترش ، فرهنگ های استارت مایع و خشک ، پنیر لپه ، خامه ترش | 10; 10; 10; 10 |
کنسانتره باکتریایی ، آماده سازی باکتریایی باکتریهای اسید لاکتیک | |
فرآورده های شیر خشک |
4.2.2 کاشت برای شمارش تعداد استرپتوکوک های لاکتیک در یک ماده غذایی مایع آگاریزه یا مایع تهیه شده مطابق بندهای 3.3.2 و 3.3.3 انجام می شود و کاشت برای شمارش تعداد میله های اسید لاکتیک - در یک محیط مایع تهیه شده مطابق بند 3.3.3.
برای تلقیح در یک ماده مغذی مواد مغذی ، آن رقیق ها انتخاب می شوند که وقتی روی صفحات کاشته می شوند ، از 15 تا 150 کلنی رشد می کنند.
از هر نمونه ، تلقیح با توجه به GOST 9225 1 سانتی متر از رقیق کننده های مناسب محصول (جدول 1) روی ظروف پتری تهیه می شود.
هنگامی که از سه یا چهار رقت آخر به یک ماده غذایی مایع مایع تلقیح شود (به جدول 1 مراجعه کنید) ، 1 سانتی متر از هر رقت به دو لوله موازی با شیر کم چربی استریل وارد می شود.
4.2.3 لوله های آزمایش یا ظروف پتری با فرهنگ در یک ترموستات قرار داده شده و برای شمارش باکتریهای اسید لاکتیک مزوفیلیک اسید ، در دمای (1 40 40) درجه سانتیگراد برای شمارش باکتریهای اسید لاکتیک ترموفیلیک و در (1 32 32) در انکوبه می شوند. شمارش مشترک باکتریهای اسید لاکتیک مزوفیلیک و ترموفیلیک اسید. محصولات زراعی برای 72 ساعت انکوبه شدند
5.1. پردازش نتایج آنالیز مواد غذایی (به جز محصولات لبنی ، کشت استارت ، کنسانتره باکتری ، آماده سازی باکتریایی باکتریهای اسید لاکتیک)
5.1.1. نتایج تجزیه و تحلیل محصول غذایی برای هر نمونه به طور جداگانه ارزیابی می شود.
5.1.2. در صورت بررسی خصوصیات فرهنگی ، مورفولوژیکی و بیوشیمیایی در تعیین:
میکروارگانیسم های اسید لاکتیک میله های گرم مثبت ، بدون تحرک ، کاتالاز منفی یا میله های غیر اسپور سازنده ، گرم مثبت ، بی تحرک ، کاتالاز منفی یا تشکیل دهنده کوکسی pseudocatalase را تشخیص دادند ، نتیجه می گیرند که میکروارگانیسم های شناسایی شده اسید لاکتیک هستند.
باکتریهای جنس Lactobacillus ، باسیلهای غیر اسپور تشکیل دهنده ، گرم مثبت ، بدون تحرک ، کاتالاز منفی یافت شد ، سپس نتیجه می گیرند که میکروارگانیسم های شناسایی شده متعلق به جنس Lactobacillus هستند.
باکتریهای موجود در جنس Leuconostoc ، بدون اسپور تشکیل دهنده ، گرم مثبت ، بدون تحرک ، کاتالاز منفی ، که توسط یک کپسول کوکسی احاطه شده است ، یافتند و نتیجه می گیرند که میکروارگانیسم های شناسایی شده متعلق به جنس Leuconostoc هستند.
باکتریهای گروه Streptococcus جنس N بدون اسپور تشکیل دهنده ، گرم مثبت ، بدون تحرک ، کاتالاز منفی بوده و در محیط های مغذی با pH 9.6 و 6.5٪ NaCl ، کوکسی رشد نمی کند ، سپس نتیجه می گیرند که میکروارگانیسم های شناسایی شده متعلق به جنس گروه استرپتوکوک N هستند.
باکتریهای جنس Pediococcus غیر اسپور تشکیل دهنده ، گرم مثبت ، بدون تحرک ، کاتالاز-منفی (یا کاتالاز مثبت ، اما با دادن یک آزمایش بنزیدین منفی) یا کوکسی های pseudocatalysis مثبت را تشخیص دادند ، سپس نتیجه می گیرند که میکروارگانیسم های شناسایی شده متعلق به جنس Pediococcus هستند.
باکتریهای گونه S.thermophilus ، بدون اسپور تشکیل دهنده ، گرم مثبت ، بدون تحرک ، کاتالیز منفی ، گرمازدایی ، گرما یافته شده که در محیطهای مغذی با pH 9/9 و 6.5 درصد NaCl رشد نمی کنند ، نشان می دهد که میکروارگانیسم های شناسایی شده متعلق به گونه های Streptococcus thermophilus هستند.
5.1.3. اگر هنگام تأیید مستعمرات مشخصه ، در 80٪ موارد ، یعنی حداقل در 4 از 5 کلنی ، رشد برخی از گروهها یا جنس میکروارگانیسم ها تأیید شود ، در این صورت اعتقاد بر این است که کلیه مستعمرات مشخصه رشد یافته در یک فنجان متعلق به این گروه ، جنس یا گونه است. در موارد دیگر ، تعداد میکروارگانیسم ها بر اساس درصد کلونی های تأیید شده به تعداد کلنی های مشخصه که برای تأیید گرفته شده تعیین می شود.
5.1.4. هنگام تعیین VLF یا هنگام تلقیح یک محصول روی رسانه مایع ، لوله ها مثبت تلقی می شوند ، اگر در طول تحقیقات بعدی بر روی رسانه های آگار و تأیید مستعمرات مشخصه ، میکروارگانیسم های گروه های تعریف شده ، جنس ها یا گونه ها حداقل در یک کلنی مشخصه یافت شوند.
5.1.5. محتمل ترین تعداد (VLF) میکروارگانیسم ها با تعداد لوله های مثبت مطابق با GOST 30425 تعیین می شود.
اگر رقت های ده برابر انتخاب شده برای کاشت بیشتر بود ، به عنوان مثال 10 ، 10 و 10 ، در این صورت مقدار جدول بندی شده LFV با اختلاف بین رقیق های ده برابر انتخاب شده و جدول بندی شده ضرب می شود ، یعنی 100.
اگر ده رقیق انتخاب شده برای کاشت کمتر باشد ، به عنوان مثال 10 (1 گرم) ، 10 ، 10 ، سپس مقدار جدول بندی شده UHF با تفاوت بین رقیق های ده برابر انتخاب شده و جدول بندی شده تقسیم می شود ، یعنی 10.
5.1.6. نتایج تعیین تعداد میکروارگانیسم ها با تلقیح در ظروف پتری یا با روش VHF یا با استفاده از روش فیلتراسیون غشایی بر روی 1 گرم یا یک سانتی متر محصول محاسبه می شود و مطابق با الزامات GOST 26670 ثبت می شود.
5.1.7. نتایج تعیین حضور میکروارگانیسم ها در یک نمونه خاص از محصول به شرح زیر بیان می شود: میکروارگانیسم های اسید لاکتیک (در صورت لزوم ، جنس یا گونه آن مشخص شده است) در نمونه محصول یافت می شود یا یافت نمی شود.
5.2 پردازش نتایج آنالیز فرآورده های شیر تخمیر شده ، کشتهای استارت ، کنسانتره باکتریها و آماده سازی باکتریایی باکتریهای اسید لاکتیک
5.2.1. با رشد باکتریهای اسید لاکتیک در یک محیط مایع ، شیر - شیر منعقد می شود.
برای محاسبه تعداد کل باکتریهای اسید لاکتیک (استرپتوکوک و میله) ، سه رقیق آخر ذکر شده است که در آن شیر فرش شده است.
یک ویژگی عددی را بنویسید. از سه رقم تشکیل شده است که سه رقم آخر را نشان می دهد. رقم اول از ویژگی عددی مربوط به رقیبی است که در آن شیر در دو لوله پیچیده شده است. اعداد زیر تعداد لوله های شیر پنیر را در دو رقیق بعدی نشان می دهد.
با توجه به ویژگی عددی در جدول 2 ، محتمل ترین تعداد میکروارگانیسم های اسید لاکتیک یافت می شود ، که با رقیبی که از آن اولین رقم عددی شروع می شود ، ضرب می شود.
جدول 2
ویژگی عددی | محتمل ترین تعداد میکروارگانیسم ها در هنگام آلوده بودن دو لوله موازی است |
ترکیبات غیرقابل قبول در جدول ذکر نشده است.
تعداد حاصل با تعداد سلولهای باکتری اسید لاکتیک در 1 گرم یا 1 سانتی متر محصول مطابقت دارد.
نمونه ای از محاسبه محتمل ترین تعداد میکروارگانیسم ها در صورت آلوده بودن دو لوله موازی در پیوست 3 آورده شده است.
اگر لازم است به طور متفاوتی تعداد استرپتوکوک ها و میله ها را تعیین کنید ، از بین لوله هایی که شیر در آن پیچیده شده است ، مطابق با GOST 9225 یک میکروسکوپی تهیه کنید ، به آن نگاه کنید و به طور جداگانه لوله هایی را که در آن میله ها و استرپتوکوک ها وجود دارد ، یادداشت کنید.
محاسبه تعداد استرپتوکوک های لاکتیک یا میله ها همانطور که در بالا گفته شد انجام می شود.
5.2.2. شمارش تعداد کلنی های رشد یافته باکتری های اسید لاکتیک در محیط آگار و محاسبه مجدد محتویات آنها در 1 گرم یا 1 سانتی متر از محصول مطابق با GOST 9225 انجام می شود.
پیوست 1
مرجع
نام میکروارگانیسم ها | ویژگی |
میکروارگانیسم های اسید لاکتیک (به استثنای جنس Sporolactobacillus که مطابق با GOST 30425 مشخص شده است) | باسیلهای غیر اسپور تشکیل دهنده ، گرم مثبت ، بدون تحرک ، کاتالاز منفی یا غیر اسپور تشکیل دهنده ، گرم مثبت ، بی تحرک ، کاتالاز منفی یا تشکیل دهنده کوکسی pseudocatalase |
باکتری های لاکتوباسیلوس | باسیلهای گرم مثبت ، بدون اسپور تشکیل بیسیلی کوتاه یا طولانی ، بدون تحرک ، کاتالاز منفی |
باکتری های تشکیل دهنده مخاط از جنس Leuconostoc | گرم مثبت ، بدون اسپور تشکیل شده ، کروی یا بیضی شکل ، مرتب شده به صورت جفت یا زنجیر ، محاصره شده توسط کپسولی که مطابق با گرم ، کوکسی های بدون تحرک کاتالاز و لکه ها ایجاد نمی شود. |
گروه استرپتوکوک N از جنس استرپتوکوک | گرم مثبت ، بدون اسپور تشکیل شده ، به صورت زنجیره های کوتاه و بلند ، بی حرکت ، منفی کاتالاز و در محیط های مغذی با pH 9.6 و 6.5٪ NaCl کوکسی رشد نمی کند |
باکتری های جنس Pediococcus | گرم مثبت ، بدون اسپور ، به صورت جفت و تتراس ، مرتب نشده ، کاتالاز منفی یا تشکیل کوکسی pseudocatalase |
استرپتوکوکوس S.thermophilus | گرم مثبت ، مرتب شده به صورت جفت یا به صورت زنجیرهای کوتاه یا بلند ، بی حرکت ، منفی و کاتالاز ، گرماسفر ، در محیط های مغذی با pH 9.6 و 6.5٪ NaCl کوک رشد نمی کند. |
پیوست 2
مرجع
میکروارگانیسم ها | محیط فرهنگی | خصوصیات کلونی ها یا الگوی رشد در یک محیط مایع |
میکروارگانیسم های اسید لاکتیک | مایع Blikfeldt | تغییر رنگ محیط از بنفش به زرد ، کدورت محیط و یا تشکیل رسوب ، تکامل گاز |
آلیک Blikfeldt ، آب گوجه فرنگی متوسط | مستعمرات کوچک ، صاف یا ناهموار |
|
کلم آگار | مستعمرات توسط یک منطقه شفاف احاطه شده اند |
|
باکتری های لاکتوباسیلوس از جنس Lactobacillus یا میکروارگانیسم های اسید لاکتیک | Rogosa و MRS آگار زدند | مستعمرات بی رنگ با قطر 1 تا 3 میلی متر ، عدس یا به شکل ستاره هستند |
مایع Rogosa و MRS | کدورت |
|
باکتریهای اسید لاکتیک از جنس Leuconostoc | آگار مغذی با ساکارز | مستعمرات محدب ، گرد ، مخاطی هستند. وقتی کلنی ها با سوزن یا حلقه باکتریولوژیکی برداشته می شوند ، الیاف مخاطی تشخیص داده می شوند |
باکتریهای اسید لاکتیک از جنس گروه استرپتوکوک N | S. lactis مستعمره هایی به رنگ سفید ، کوچک ، گرد ، در اطراف مستعمرات ممکن است مناطق روشنگری وجود داشته باشد |
|
مستعمرات S. cremoris کوچک ، زرد ، بیضوی |
||
باکتریهای لاکتیک جنس Pediococcus | چهارشنبه Briggs در اصلاحات شارپ | مستعمرات کوچک ، صاف یا خشن هستند |
استرپتوکوک Lactic S.thermophilus | مستعمرات زرد ، گرد یا بیضوی هستند که در اطراف آن مناطق روشنگری مشاهده می شود |
پیوست 3
مرجع
مثال 1 | ||||
پرورش گرفته شده است | ||||
تعداد لوله های آزمایشی با محصولات زراعی | ||||
تعداد لوله\u200cهای شیر منعقد شده |
یک ویژگی عددی را بنویسید. از سه عدد تشکیل شده است که تعداد لوله های شیر خرد شده خرد شده را در سه رقت آخر نشان می دهد. رقم اول (سمت چپ) از ویژگی عددی 2 است (2 لوله رقیق 1: 100 پیچ خورده است) ، دوم 1 و 1 سوم است.
بنابراین ، ویژگی عددی 211 خواهد بود. مطابق جدول 2 با شماره 13.0 مطابقت دارد. این عدد را باید با رقیق شدن که اولین رقم از ویژگی عددی را آغاز کرد ضرب کنید (به عنوان مثال ، این رقت 1: 100 است).
بنابراین ، 1 سانتی متر حاوی 1300 باکتری اسید لاکتیک (13.0x100 \u003d 1300) است.
مثال 2 | ||||
پرورش گرفته شده است | ||||
تعداد لوله های آزمایشی با محصولات زراعی | ||||
تعداد لوله\u200cهای شیر منعقد شده | ||||
استرپتوکوک در آماده سازی میکروسکوپی رقیق های زیر یافت می شود | ||||
باسیل های اسید لاکتیک در آماده سازی میکروسکوپی رقیق های زیر یافت می شود | ||||
ویژگی عددی برابر است با: استرپتوکوکی | ||||
تعداد احتمالی میکروبها برای استرپتوکوکها برابر است | ||||
با تکثیر با پرورش ، تعداد استرپتوکوک ها را در 1 سانتی متر - 7000 ، میله - 250 می گیریم.
متن الکترونیکی سند
تهیه شده توسط Codex JSC و تأیید در برابر:
انتشار رسمی
محصولات غذایی ، مواد غذایی کنسرو شده.
روش های تجزیه و تحلیل میکروبیولوژیکی:
نشسته GOST ها - م.: Standartinform ، 2010
